MDM2在乳腺癌上皮细胞间质转化中的作用及机制研究

原癌基因MDM2高表达与包括乳腺癌在内的多种肿瘤的侵袭转移有关，但MDM2在肿瘤侵袭转移中的作用及机制目前尚不清楚。近来的研究证实，上皮细胞间质转化(EMT)是决定肿瘤侵袭和转移程度的关键因素之一。我们最近的研究发现，在乳腺癌细胞MCF-7中过表达MDM2明显导致上皮细胞分子标记E-Cadherin表达下降和间质细胞分子标记N-Cadherin表达升高。且MDM2过表达显著促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭并能上调EMT的调节因子MMP-9的启动子和酶活性。由此我们推测：MDM2高表达促进乳腺癌EMT的发生。本项目拟从临床标本检测、细胞水平和移植瘤裸鼠模型三个方面对此假说进行验证，并运用RNA干扰和Real-time PCR等技术深入探讨MDM2促进乳腺癌EMT发生的机制。本项目的研究结果不仅为进一步阐明肿瘤转移的分子机制奠定一定的理论基础，更为乳腺癌转移预防和治疗药物的研发提供理论和实验依据。

目的：探讨MDM2（鼠双微粒体2)在乳腺癌侵袭转移及上皮间质转化中的作用及其分子机制。方法：通过划痕试验和细胞侵袭试验来验证MDM2在细胞水平促进乳腺癌细胞的侵袭转移，应用定量PCR、Western blot检测MMP9、EMT相关分子标记物及转录因子Snail的表达，另外，我们构建了表达MDM2的慢病毒，筛选得到MDM2稳定转染细胞株及对照细胞，接种裸鼠，从动物水平验证MDM2在乳腺癌侵袭转移及上皮间质转化中的作用及其分子机制。结果：划痕试验和细胞侵袭试验表明MDM2在细胞水平促进乳腺癌细胞的侵袭转移，MCF-7细胞瞬时转染pcmv-MDM2质粒后，上皮标记分子表达下调，间质标记分子上调，细胞形态由鹅卵石形变为纺锤形，且MMP9和转录因子Snail均上调。最后，我们成功构建MDM2稳定转染细胞株（MCF-7/MDM2-a）MDM2表达上调，细胞形态由鹅卵石形变为纺锤形，而且上皮标记分子E-cadherin表达下调，转录因子Snail1表达上调。裸鼠实验的体内结果与体外结果一致。结论: MDM2在细胞水平促进乳腺癌细胞的侵袭转移，且MDM2在体内和体外均通过转录因子Snail上调来促进乳腺癌细胞EMT。