负性共刺激分子BTLA在HBV慢性感染中的表达及作用

The mechanism of chronic hepatitis B virus (HBV) infection is the current focus and cutting-edge of immunology research. Recent studies have shown that the immune costimulatory molecules play an important role in HBV infection. BTLA is a negative costimulatory molecule following CTLA-4 and PD-1 which plays an important role in the regulation of T cell immunity and in maintaining immune balance. Our previous studies have shown that BTLA was highly expressed in the CHB patients and with disease progression from CHB to HBV-related acute on chronic liver failure, the BTLA expression on CD4+T and CD8+T cells showed a progressive decline, and reversely correlated with HBV DNA load, indicating that BTLA was closely associated with chronic HBV infection. The current project will investigate the expression profile of BTLA in liver tissues and peripheral lymphocyte of patients with chronic HBV infection, and analyze the correlation between the expression of BTLA and the disease progression. Furthermore, we will study the effect of BTLA on T cell activation, secretion of cytokine, proliferation and apoptosis. Finally, we will identify the genes associated with the signaling pathways, which were significantly changed in T lymphocytes after stimulated by BTLA by microarray and bioinformatics analysis.

慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染机制是当前免疫学研究的重点和前沿，研究表明免疫共刺激分子在其中发挥重要作用。BTLA是继CTLA-4、PD-1之后发现的另一个具有负向调节功能的共刺激分子，在调节T细胞免疫以及维持机体免疫平衡方面发挥重要作用。我们前期研究表明BTLA分子在慢性乙型肝炎（CHB）患者中高表达，随着CHB向HBV慢加急性肝衰竭临床进展，CD4+T和CD8+T细胞上BTLA表达呈进行性下降，且与HBV病毒载量呈负相关，提示BTLA与HBV慢性感染密切相关。本课题拟利用临床标本研究BTLA在慢性HBV感染者肝组织以及外周淋巴细胞中的表达水平与特点，同时与HBV感染疾病进程进行相关性分析，在此基础上探讨BTLA对CHB患者外周血T淋巴细胞活化、分泌细胞因子、增殖及凋亡的影响，并进一步运用基因芯片及生物信息分析技术检测并筛选出BTLA作用T淋巴细胞后信号通路表达发生明显改变的相关基因。

众所周知，乙肝病毒相关的慢加亚急性肝衰竭（HBV-ACLF）患者后期往往存在T细胞功能耗竭及容易并发感染等的现象，但机制未明。B和T细胞弱化因子（BTLA）是继CTLA-4、PD-1之后发现的另一个具有负向调节功能的共抑制分子，在调节T细胞免疫耐受以及维持机体免疫平衡方面发挥重要作用。迄今，尚未知BTLA是否参与调节HBV-ACLF中的T细胞功能耗竭及抗微生物反应。本课题拟利用临床标本研究BTLA在健康体检者（NC）、慢性乙型肝炎（CHB）及HBV-ACLF肝组织以及外周淋巴细胞中的表达水平与特点，同时与HBV感染疾病进程进行相关性分析，在此基础上探讨BTLA+T细胞的表型特点，BTLA对外周血T淋巴细胞活化、分泌细胞因子、增殖及凋亡的影响，以及促使BTLA发生数量及功能变化的因素；并进一步运用二代测序及生物信息分析技术检测并筛选出BTLA发挥作用的信号通路。本课题首次证实，LPS及炎症因子（IL-6和TNF-a）可促使CD4+T细胞（特别是Tem细胞）代偿性表达BTLA分子增多，而并非是在CD8+T细胞上表达增多。相比于CD4+BTLA-T细胞，CD4+BTLA+T细胞表现为损伤的抗微生物反应表型。BTLA可通过PI3K-Akt信号通路抑制CD4+T细胞活化、增殖及分泌炎症因子，促进其凋亡，促使CD4+T细胞功能耗竭；敲减BTLA的表达或阻断其PI3K-Akt信号通路可恢复CD4+T细胞的功能。BTLA分子表达越高，CD4+T细胞功能耗竭程度越深，疾病严重程度越高，越容易并发二次感染，死亡风险也随之增加。总之，BTLA是诱导HBV-ACLF患者CD4+T细胞功能耗竭及容易并发感染的一个重要因素，我们的发现有助于阐明HBV-ACLF的发病机制，同时也提供了一个新的药物靶点。