用噬菌体展示技术构建HIV Tat疫苗的候选物

人类免疫缺陷病毒（HIV）编码产生的重要调控蛋白Tat分子是HIV 疫苗的靶蛋白之一，它具有天然非折叠蛋白特征，构象处于快速动态变化之中，这使得天然Tat疫苗及Tat合成肽疫苗存在诱发免疫保护性抗体滴度低、交叉反应性差等不足。本项目针对HIV不同亚型Tat分子N端区和碱性区中和表位，应用噬菌体展示技术，构建分别含这两个区域中和表位随机串联重复的噬菌体展示文库，以具有中和活性的抗Tat多克隆抗体对该文库进行多轮筛选，获得不同序列特征的新Tat免疫原分子并进行原核表达，以水包油乳剂MF59为佐剂制备疫苗，接种小鼠、家兔，观察其免疫原性及诱导抗体的交叉反应性；用重组融合蛋白为刺激抗原，检测免疫小鼠T淋巴细胞功能和分泌的细胞因子；以染色体中整合有HIV LTR区及其调控报告基因的Hela细胞株为模型，检测抗体对Tat的直接中和作用，为发展新的HIV Tat疫苗候选抗原提供切实的试验依据。