苦参碱对宫颈癌细胞增殖凋亡的影响及信号传导调控机制研究

This research take the matrine and cervical cancer cell proliferation and apoptosis relationship as the breakthrough point ,to investigate the effect of matrine on jak-stat signaling in cervical cancer cell and illustrate whether jak-stat signaling is involved in matrine induced cell death in cervical cancer cell and associated molecular mechanism . There are six parts in the study: ①Whether the matrine inhibit the proliferation of cervical cancer cells, and their anti-proliferative effect mode; ②Whether jak-stat signaling is involved in matrine induced cell death in cervical cancer cell; ③Whether matrine could inhibit the phosphorylation of STAT3 in cervical cells; ④Whether the matrine inhibit the activation of jak; ⑤The effects of matrine on cervical cancer cells of inhibition factor of JAK-STAT3; ⑥Through the siRNA silence those inhibitors of jak-stat pathways，we study the effects of matrine From the protein and gene transcription level ,we investigate the effect of matrine on the expression and activation of important protein kinases in signal transduction pathways in cervical cancer cell, reveal of the mechanism of matrine in the treatment of cervical cancer , give novel insight to the understanding of matrine as clinical effective drugs and provide the experimental data and theoretical research for the treatment of cervical cancer.

本研究以苦参碱与宫颈癌细胞增殖、凋亡的关系为切入点，研究苦参碱是否通过jak-stat信号传导通路，参与调控宫颈癌细胞增殖、凋亡的分子机制。研究内容：①苦参碱能否抑制宫颈癌细胞的增殖，其抗增殖效应的作用方式；②是否通过jak_stat信号通路产生作用；③苦参碱能否抑制宫颈癌细胞stat3的磷酸化；④苦参碱是否抑制jak的活化；⑤苦参碱对宫颈癌细胞的jak-stat3的抑制因子的作用；⑥通过siRNA沉默jak-stat通路中的抑制蛋白，研究苦参碱在此状态下的作用。研究的意义：有助于阐明苦参碱通过JAK-STAT信号传导通路,调节宫颈癌细胞增殖、凋亡的分子机制。从蛋白水平和基因转录水平研究其对信号转导通路中重要蛋白激酶在宫颈癌细胞表达和活化的影响,揭示苦参碱在宫颈癌治疗机制中的作用，为苦参碱作为宫颈癌治疗的临床有效药物提供实验基础和理论研究。

宫颈癌位居女性恶性肿瘤第二 ,随着宫颈癌患者人数的增加和年轻化趋势，给家庭和社会带来了沉重的经济负担。近年来手术、放疗、化疗已成为治疗的一部分。但这些治疗的费用较高, 且对晚期宫颈癌的效果也不是很理想。我国天然抗肿瘤中草药丰富，具有系统理论的指导和丰富的临床验证经验，比较安全、毒副作用小。苦参碱作为中药治疗各种癌症，确定其对宫颈癌的作用机制,将会是宫颈癌防治工作的一大突破。研究①培养人宫颈癌细胞株,MTT检测苦参碱对宫颈癌细胞的作用效应；流式细胞仪测苦参碱干预后细胞凋亡的变化；realtime PCR、westernblotting法检测苦参碱干预后caspase-3、stat-3、JAK1，JAK2，PIAS1，SHP2和SCOS3的mRNA、蛋白的表达情况;②采用caspase-3的抑制剂Z-DEVD-FMK 干预宫颈癌细胞，观察caspase-3蛋白的表达.③将SHP-2 shRNA,SOCS-3 shRNA慢病毒表达载体转染宫颈癌细胞，用 Western blotting、realtime PCR 帅选符合要求的细胞。④苦参碱干预hela细胞、SHP-2 shRNA-hela细胞、SOCS-3 shRNA-hela细胞、siha细胞、SHP-2 shRNA-siha细胞、SOCS-3 shRNA-siha细胞，检测各组细胞增殖的能力及stat3、JAK1和JAK2蛋白表达水平。 意义:①MTT检测结果显示苦参碱抑制宫颈癌细胞的增殖,且存在剂量与时间的依赖关系;流式结显示随着作用时间的延长,凋亡率逐渐增高。②观察Z-DEVD-FMK表明苦参碱诱导宫颈癌细胞的凋亡其可能与caspase-3激活相关。③realtimePCR、westblotting检测苦参碱作用后stat-3、JAK1，JAK2 mRNA蛋白表达降低(P<0.05)，而SHP2和SCOSmRNA、蛋白表达升高(P<0.05), PIAS1的mRNA、蛋白无明显改变(P﹥0.05)。④苦参碱对转染质粒的细胞与未转染质粒的细胞相比，MTT结果显示转染质粒的细胞凋亡率增高；Western blotting显示stat3、JAK1和JAK2蛋白升高(P<0.05)。⑤苦参碱对宫颈癌细胞有抑制作用。其作用机制可能为阻断细胞JAK-STAT信号转导通路，有望成为治疗宫颈癌以及抑制其侵袭转移的一种新的策略。