益气温阳活血法对心衰时线粒体通透性转变介导的心肌细胞自噬的调节作用

近年来自噬在心衰发病中的作用受到重视，自噬引起的心肌细胞死亡被认为在心衰发病过程中起到了重要作用。调节心衰时心肌细胞自噬可能能提高心衰治疗效果，成为心衰治疗的新策略，但目前临床尚未有相关治疗的新药。益气温阳活血法治疗心衰取得显著疗效，可能具有调节心衰时心肌细胞自噬的作用。代表方心阳片治疗心衰已经取得了很好疗效，动物实验也已证明其具有改善心功能抗凋亡等的作用。本研究通过制备整体动物模型和培养原代细胞，利用Western blot、Real-time PCR、MPT开放剂、荧光探针、透射电镜等方法，在细胞和整体水平研究益气温阳活血法对心衰时MPT介导的心肌细胞自噬的调节作用及机制。其研究结果将为中医益气温阳活血法防治心衰提供新证据，并为筛选调节心肌细胞自噬防治心衰的中药新药提供依据，同时对全面认识心阳片的药理作用及其在临床广泛应用及开发为中药新药提供学术支持。

本研究拟通过制备整体动物模型和培养原代细胞，利用Western blot、Real-time PCR、MPT开放剂、荧光探针、透射电镜等方法，在细胞和整体水平研究益气温阳活血法对心衰时MPT介导的心肌细胞自噬的调节作用及机制，以明确益气温阳活血法是否具有调节心衰时心肌细胞自噬的作用以及其作用是否是通过调节MPT而实现的。本研究通过检测大鼠心功能，大鼠心肌细胞自噬相关蛋白和自噬小泡大鼠心肌细胞线粒体膜电位，心肌细胞线粒体形态，心肌细胞ATP、Na+-K+ ATP酶活性，首先证明了心阳片具有改善心衰大鼠心功能的作用，并具有抑制心衰大鼠心肌细胞自噬，抑制心衰心肌细胞线粒体通透性增高导致的线粒体膜电位降低，改善心肌细胞线粒体肿胀，ATP的合成和Na+-K+ ATP酶活性的作用。另外，本研究通过检测使用MPTP开放剂后再给予心阳片后的大鼠心功能，大鼠心肌细胞线粒体膜电位，大鼠心肌细胞自噬相关蛋白，心肌细胞ATP、Na+-K+ ATP酶活性，证明了MPTP开放会拮抗心阳片抑制心衰心肌细胞MPT和自噬，改善心功能的作用。MPT介导了心阳片调节心肌细胞自噬改善心功能的作用。益气温阳活血法代表方心阳片调节心肌细胞自噬改善心功能是通过调节线粒体通透性途径实现的。该成果阐明了MPT介导了心衰心肌细胞自噬，以及益气温阳活血法代表方具有调节MPT介导的心肌细胞自噬防治心衰的作用，为调节自噬防治心衰的治疗策略提供了实验依据，并为益气温阳活血法防治心衰提供新的理论和实验依据，将推动益气温阳活血法及其代表方心阳片作为具有调节心衰心肌细胞自噬防治心衰的重要治法和药物在临床上的推广应用，并将带来较好的社会价值和经济价值。