益气化瘀通络中药组方促心肌梗死大鼠血管新生的作用机制研究

In this study, we plan to observe the facilitating angiogenesis effect on infarcted or non-infarcted myocardial tissue of rats in different disease process induced by the "reinforcing Qi, remove blood stasis and dredging collaterals" compound prescription and the separated prescription of "reinforcing Qi", "remove blood stasis" or "dredging collaterals", including morphologic changes, expression of some special associated cytokines with their receptors at mRNA and protein level, using the "compound recipe-separated complex prescription" of prescription study method in chinese indigenous medicine, according to the pathogenic mechanism of "collaterals blockage due to Qi deficiency and blood stasis", and directed by traditional chinese theory of "reinforcing Qi, remove blood stasis, dredging collaterals and activating pulse". Our aim is to explore molecular mechanisms of myocardial angiogenesis facilitated by the "reinforcing Qi, remove blood stasis and dredging collaterals" prescription from the point of view of combination of traditional chinese medicine with western medicine, and to furnish help in theory and practice for individual and standardized therapeutics of myocardial infarction according to disease process.

本研究中，我们拟在中医学"益气化瘀通络生脉"的理论指导下，从心肌梗死"气虚血瘀络痹"的病因病机出发，结合方剂学"组方拆方"研究方法，观察"益气化瘀通络"中药组方全方及"益气"、"化瘀"、"通络"各拆方在大鼠心肌梗死疾病不同发展阶段分别对梗死区和非梗死区心肌组织血管新生的影响，包括组织形态学变化和相关细胞因子及其受体的转录和表达变化。旨在从中西医结合角度探究"益气化瘀通络"中药组方促心肌梗死后血管新生的作用机制，为中医学根据疾病进程治疗心肌梗死个体化规范化调整用药提供理论和实践依据。

当前，中医药在心肌梗死等缺血性心肌疾病的治疗中取得了积极的临床效果，然而，其作用机理的探讨尚欠深入。.本研究中，我们首先采用经典的冠状动脉左前降支结扎法复制大鼠心肌梗死模型，并动态观察心肌梗死后12h-28d各时间点梗死区域心肌组织病理形态学形态变化特征、血管生成相关细胞因子VEGF的表达变化。结果证实，在心肌梗死的前3d内，梗死区心肌组织受损伤刺激，新生的肉芽组织生成较多；梗死后7d，毛细血管结构渐趋消失，肉芽组织逐渐老化，转变为胶原纤维组织，至14d后，梗死区域的心肌组织几乎完全为胶原纤维所取代。VEGF的表达在第3d达到高峰，随之迅速下降，至7d后几乎检测不到。.接下来，我们进一步观察了益气化瘀通络中药组方对心梗后心肌组织病理形态学、血管生成相关细胞因子表达等的影响。药物干预组分为黄芪组、丹参组、全方组，另设辛伐他汀对照组。组织病理学结果表明，各组药物治疗后，梗死区域的心肌组织渐趋恢复正常，且诱导出结构完整的新生的毛细血管，电镜下血管内皮细胞清晰完整，并可见周细胞伴随。从药物治疗的组织病理学动态进程可见，药物作用7d内，组织形态学变化不太明显。14d后可见诱导出的新生的毛细血管，至28d，新生的血管发育成熟。药物作用后28d的血管生成相关细胞因子及其受体VEGF、Flt-l、KDR、bFGF、FGFR、PDGF-B、PDGF-BR、Ang-l、Ang-2、Tie-2的 mRNA和蛋白表达均明显上调。这表明，中药黄芪、丹参及其配伍组方在治疗心肌梗死的进程中，有明显上调血管新生相关细胞因子表达、促血管新生的作用；其促血管新生的作用不是通过作用于单一细胞因子，而是通过对多种生长因子综合作用的结果。这其中，VEGF及其受体Flt-l、KDR，Ang-l、Ang-2及其受体Tie-2发挥着关键的作用。从药物作用效果分析，全方组的作用较黄芪或丹参组更佳。这表明，黄芪、丹参、红景天、水蛭、全蝎等中药配伍具有协同之功效，在治疗心肌梗死的进程中，通过补中益气扶正以固本虚，活血化瘀通络以祛邪，补益气血意在养脉促生新络，益气活血化瘀重在疏通脉络，“生”、“通”并用，血行复常。.综上所述，本研究初步阐明了益气化瘀通络中药组方促大鼠心肌梗死后心肌组织内血管新生的作用机制，并为中药复方替代西药在心肌梗死等缺血性疾病中的安全应用提供了可信的实验依据。