基于血管内皮细胞质膜微囊的调控，探讨人参皂苷Rb1对LPS诱导的大鼠血浆白蛋白漏出的固摄作用

由内毒素引起的脓毒性休克脱证是病死率较高的危重症，微血管损伤和血浆白蛋白漏出是其关键病理环节。中医以热毒致脱立论，设补气固脱治法，用人参为主的中药救治，有良好的临床疗效。人参皂苷Rb1（Rb1）是人参的主要有效成分之一。我们前期的研究证实了Rb1可改善脂多糖（LPS）引起的大鼠肠系膜微循环障碍，抑制血浆白蛋白经由细静脉的漏出。但是,Rb1固摄血管的机制尚不清晰。本项目在LPS引起的大鼠肠系膜细静脉血浆白蛋白漏出后，观察Rb1后给药的改善效果，进一步明确Rb1固摄微血管、抑制血浆白蛋白漏出的作用；通过研究Rb1对LPS诱导的血管内皮细胞的质膜微囊形成(血管内皮细胞转运血浆白蛋白的主要途径)和质膜微囊蛋白1（质膜微囊形成的关键蛋白）表达相关信号传导途径的干预作用，部分地揭示Rb1固摄血管的作用机理,为补气固脱治法增加新的内涵,为含有Rb1的中药临床用于脓毒性休克的救治提供科学依据。

本项目依据标书，完成了研究内容。论文投稿过程中，应Am J Physiol-Gastrointest Liver Physiol审稿人建议，增加了部分研究内容。.本项目获得了以下研究结果：.1. 人参皂苷Rb1（Rb1）在LPS连续滴注前30分钟或在LPS连续滴注30分钟后开始连续给药（均5 mg/kg/hr）都可以改善Wistar大鼠96小时的生存率、减轻在LPS连续滴注90分钟和96小时大鼠肺和肠管组织微血管周围的水肿、抑制大鼠肠系膜细静脉血浆白蛋白经由细静脉的漏出，具有固摄作用。其中，前给药的作用优于后给药的作用。.2. Rb1可以抑制LPS诱导的大鼠肠管组织微血管内皮细胞脂膜微囊数量、脂膜微囊蛋白-1的表达，抑制LPS诱导的人脐静脉血管内皮细胞脂膜微囊数量、脂膜微囊蛋白-1的表达和磷酸化。Rb1抑制血管内皮细胞脂膜微囊数量、脂膜微囊蛋白-1表达增加的作用与其抑制细胞内I-κBα磷酸化、抑制转录因子NF-κB p65的核转移相关。Rb1抑制血管内皮细胞脂膜微囊蛋白-1磷酸化的作用与其抑制血管内皮细胞Src磷酸化相关。.3. Rb1可以抑制LPS诱导的血浆IL-6浓度的升高、抑制MPO阳性细胞的数量、抑制CD18阳性细胞和CD68阳性细胞的浸润、抑制MMP-9和MMP-2阳性细胞的表达。.4. 应投稿杂志审稿专家的建议，本项目增加了部分实验，发现Rb1还可以抑制细胞缝隙连接蛋白ZO-1表达的降低，抑制细胞粘附连接蛋白VE-Cadherin磷酸化。该作用也参与了Rb1的固摄作用。.5. 根据本研究的部分结果撰写的英文论文"Ginsenoside Rb1 ameliorates lipopolysaccharide-induced albumin leakage from rat mesenteric venules by intervening in both trans- and paracellular pathway"已经在Am J Physiol-Gastrointest Liver Physiol杂志发表 [Epub ahead of print，2013] ，并在微循环国际研讨会暨第十三次全国中西医结合微循环学术年会会议上做了专题报告。.6. 张玉等博士研究生、孙凯等技术骨干参加了本研究工作。张玉以本课题为基础完成了博士论文。