结直肠癌转移状态与TGF-β调控网络的相关性及益气化瘀解毒方干预作用研究

The primary tumor, circulating tumor cells(CTCs) and metastasis of colorectal cancer(CRC) relate to EMT. Researches showed that TGF- beta could promote EMT combining its receptors TGFBR1 and TGFBR2 by Smads protein, but TGFBR2 was low expressed in CRC tissues, so that the mechanism of TGF- beta regulating CRC metastasis isn't still clear. This project uses the HCT116 cells, respectively, inhibits TβRⅠ,TβRⅡ, determines the expressions of E-cadherin, Vimentin, to explore the relationship between TGF- beta, TβRⅠ, TβRⅡand EMT. Determine the expressions of E-cadherin, Vimentin and TGF-beta, TβRⅠ, TβRⅡ, Smad3, Smad7 of primary tumor, CTCs and metastasis tumor in nude mice model of HCT116 cells CRC metastasis by RT-PCR,and Western blot, to reveal the key correlation TGF-β singal network with CRC metastasis and the molecular mechanism of YiqiHuayuJiedu Decoction inhibiting CRC metastasis, to provid scientific basis for Chinese medicine treatment of CRC metastasis.

结直肠癌（CRC）的原发灶、肿瘤循环细胞（CTCs）、转移灶均与EMT有关。研究表明，TGF-β与其受体TβRⅠ、TβRⅡ结合，经Smads蛋白促进EMT，而CRC组织中TβRⅡ却呈低表达，因此，TGF-β调控CRC的EMT机理尚待研究。本项目采用HCT116细胞，分别沉默TβRⅠ、TβRⅡ，测定细胞E-cadherin、Vimentin等表达，探索TGF-β、TβRⅠ、TβRⅡ与EMT的关系。建立HCT116细胞的CRC转移裸鼠模型，在益气化瘀解毒方及配伍的干预下，取其原发灶、CTCs及转移灶组织，用RT-PCR、Western blot测定E-cadherin、Vimentin与TGF-β、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad3、Smad4、Smad7的表达，揭示TGF-β信号网络与CRC转移的相关性及益气化瘀解毒方干预CRC转移的分子机制，为中医药治疗CRC转移提供科学依据。

结直肠癌（CRC）的转移与上皮-间质转化（EMT）相关，转化生长因子(TGF-β)信号传导网通过Smad信号通路和非Smad信号通路，影响靶基因表达，诱导CRC发生EMT及血管生成等促进肿瘤转移。本项目体外用益气化瘀解毒方（健脾消癌方）含药血清干预大肠癌HCT116细胞，发现其具有抑制HCT116的增殖，诱导其凋亡，降低侵袭力的作用；TGF-β诱导激活TGF-β信号网络和沉默TGF-β的受体TβRI/TβRII抑制 TGF-β/Smads信号网络后，采用Western Blot、RT-PCR检测EMT相关指标E-cadherin、Vimentin，证实益气化瘀解毒方通过TGF-β/Smads通路逆转HCT116 的EMT进程。通过裸鼠皮下、盲肠、尾静脉注入HCT116细胞及循环肿瘤细胞建立裸鼠结直肠癌转移模型，得到4种不同的结直肠癌转移模型的建立方法。采用经典的盲肠注射HCT116细胞制备结直肠癌转移模型方法造模，分组给药后，比较观察各组裸鼠转移率、生成率等情况，用Western Blot、免疫组化、RT-PCR方法检测原发肿瘤组织或转移瘤组织中TGF-β/Smads信号通路、EMT相关指标E-cadherin、Vimentin以及非Smad信号通路PTEN、p-PTEN、Akt、p-Akt和血管生成的变化。结果表明益气化瘀解毒方（健脾消癌方）能提高裸鼠体重、降低结直肠癌裸鼠模型转移率、抑制瘤体生长，其机制与抑制TGF-β诱导的EMT及肿瘤血管生成有关。本项目揭示TGF-β信号网络与CRC转移的相关性及益气化瘀解毒方干预CRC转移的分子机制。