基于致癌基因成瘾理论的siRNA-miRNA嵌合物设计及抗肿瘤活性研究

本课题根据致癌基因成瘾及非致癌基因成瘾理论，采用肿瘤正交治疗原则，提出siRNA-miRNA嵌合物的抗癌药物设计思路。该思路可以发挥RNAi药物中siRNA和miRNA的各自优势：siRNA药物的特异性和有效性优势可以沉默在癌发生、发展及生长过程中起关键作用的成瘾性癌基因，而miRNA沉默基因的多靶点性和温和性优势则有助于从多个通路抑制肿瘤生长，从而起到主辅相承、点面结合、协同增效的作用。本课题将以肺癌为研究对象，在完成体外筛选的基础上，将siRNA-miRNA嵌合物克隆入具有高表达效率、肺癌靶向性、低免疫原性、自身互补型的AAV9（scrAAV-9）载体，研究scrAAV-9运载siRNA-miRNA嵌合物的效率及体内抗肿瘤活性。本课题将最新理论用于指导抗肿瘤基因药物设计，采用最新的基因载体，旨在从治疗治疗基因和载体两方面同时入手，寻求行之有效的肿瘤基因治疗药物。

本课题根据致癌基因成瘾理论和非致癌基因成瘾理论，采用肿瘤正交治疗原则，提出miRNA-siRNA嵌合物的抗癌药物设计思路。通过三年的研究，证明了miRNA-siRNA嵌合物兼具siRNA和miRNA的优点，且嵌合物对肿瘤具有较好的抑制效果。.1）本课题基于致癌基因成瘾理论，前期以靶向HMGA2基因的siRNA作为嵌合物的siRNA元件，以在肺癌中具有明显抑癌基因特性的let-7i作为嵌合物的miRNA元件，构建miRNA-siRNA嵌合物，证明了miRNA-siRNA嵌合物兼具miRNA和siRNA的优点，即miRNA-siRNA嵌合物中的siRNA能有效、特异沉默相应的靶基因，而嵌合物中的miRNA能同时调控多个基因，且作用相对于siRNA 比较温和。.2）研究miRNA-siRNA嵌合物对肿瘤的影响：嵌合物RNA对肿瘤具有较好的抑制效果。但是，这些长链RNA嵌合物会诱导产生剧烈的干扰素效应。因此，我们对miRNA-siRNA嵌合物进行了优化，缩短了嵌合物RNA的长度，优化后的嵌合物中的siRNA和miRNA种子序列各自都能发挥基因沉默作用。这种嵌合物既避免了miRNA全序列和siRNA的嵌合体容易引起干扰素效应的副作用，又保留了特异性抑制靶基因和抗肿瘤的活性。.3）变换miRNA-siRNA 中的siRNA和miRNA元件，在细胞水平比较其抗肿瘤活性。在细胞水平，利用合成的双链 miRNA-siRNA 嵌合物转染细胞，通过检测肿瘤细胞增殖、迁移、凋亡、侵袭能力研究miRNA-siRNA 的抗肿瘤能力。