气虚血瘀证肺腺癌中YB-1蛋白介导的肿瘤增殖及顺铂耐药信号调控网路障碍和益气活血法干预机制

临床观察结果显示气虚血瘀证是肺腺癌的常见证型并具有高转移率和化疗耐药的特点，益气活血法能明显改善肺腺癌增殖及耐药情况，但其详细的机理还不清楚。最近研究表明YB-1蛋白介导的肿瘤增殖及耐药信号调控网络与肺腺癌增殖及化疗耐药密切相关。本研究应用shRNA干扰、二维凝胶电泳、质谱鉴定、流式细胞术及克隆形成实验；以气虚血瘀证SD大鼠荷瘤模型和气虚血瘀证肺腺癌患者为研究对象；通过体外实验、动物模型及临床试验，在体内成瘤、体外增殖及化疗耐药等多个层面上；从形态、功能及信号分子调控的角度；解析YB-1蛋白介导的肿瘤增殖及顺铂耐药信号调控网络的变化机制及益气活血法药物-槐耳颗粒的干预作用。探讨气虚血瘀证肺腺癌增殖及顺铂耐药的本质，为立足基因水平认知益气活血法干预气虚血瘀证肺腺癌增殖和顺铂耐药的分子机制提供线索。

气虚血瘀证是肺腺癌的重要证型，临床观察显示益气活血药槐耳颗粒可有效改善肺腺癌患者预后，但详细机理还不清楚。最近研究证实YB-1蛋白作为“阀门”蛋白参与调控肺腺癌增殖信号通路并与患者预后密切相关。本研究应用免疫荧光组化多重染色标记、质谱鉴定、流式细胞术、激光共聚焦等技术，通过体内实验、动物模型及临床回顾性研究，在形态、功能及信号分子调控的角度，解析YB-1蛋白介导的肺腺癌增殖信号调控网络的变化机制及益气活血药物-槐耳颗粒的干预作用。研究结果显示：①槐耳颗粒能够降低肺腺癌细胞的增殖、迁移能力，引起肿瘤细胞的凋亡比例的增加，同时引起细胞周期的阻滞；而利用siRNA/shRNA YB-1干扰技术同样能够引起肺腺癌增殖、侵袭、抗凋亡能力的降低和细胞周期阻滞。②槐耳颗粒显著降低肺腺癌细胞YB-1蛋白的表达水平，可通过YB-1/CDC25a/E2F1信号通路调控肺腺癌细胞增殖能力，也可通过YB-1/MACC1/c-MET信号通路调控肺腺癌细胞的迁移侵袭能力，另外槐耳颗粒还可以激活MAPK/p53信号通络引起肺腺癌细胞凋亡。③气虚血瘀证肺腺癌患者临床回顾性分析发现临床病理因子YB-1及其下游调控因子（CDC25a、GalNAc-T3）与患者复发和存活密切相关。④槐耳颗粒可以明显降低肺腺癌裸鼠荷瘤模型成瘤率，而利用槐耳颗粒或siRNA YB-1干预肺腺癌裸鼠荷瘤模型可显著降低成瘤组织的体积、重量及组织细胞增殖活性。本研究结果提示：气虚血瘀证肺腺癌发生发展过程中涉及多条恶性生物学行为相关信号通路的激活，益气活血药槐耳颗粒通过调控YB-1蛋白有效控制肺腺癌恶性生物学行为并可改善患者预后。本研究率先以槐耳颗粒为研究基础，YB-1蛋白为研究主线，探讨益气活法对气虚血瘀证肺腺癌中YB-1蛋白介导的生物学恶性行为及信号调控网络的干预机制。为立足基因水平认知益气活血法治疗气虚血瘀证肺腺癌的分子机制提供线索，并为临床上益气活血药物-槐耳颗粒治疗气虚血瘀证肺腺癌的进一步广泛应用提供生物学基础和理论依据。