自体自然杀伤细胞免疫疗法治疗多发性骨髓瘤的研究

异基因自然杀伤(NK)细胞在临床上能介导有效的抗多发性骨髓瘤(MM)作用，但仅有约30%的患者能找到供体而有可能接受异基因NK细胞治疗。我们研究表明：异基因NK细胞治疗难治/复发的MM患者，能使50%的患者达到(接近)完全缓解；硼替佐米和埃罗妥珠单抗能分别显著地增强自体NK细胞的抗MM作用，并具有协同作用；我们预试验发现：通过体外培养，不仅能使患者NK细胞的数量增加和抗自体MM活性显著增强，而且埃罗妥珠单抗具有协同增强扩增后自体NK细胞的抗瘤功效。本课题拟运用基因修饰的K562细胞株，扩增和活化患者的自体NK细胞，研究扩增前后NK细胞的生物学功能、抗自体MM作用的变化及机制；阐明硼替佐米、埃罗妥珠单抗和扩增后自体NK细胞联合应用，在骨髓瘤免疫治疗中的作用及机制。本项目将为MM及其他NK细胞敏感肿瘤的治疗新途径提供可靠的实验依据及新的思路和方法，使NK细胞治疗适合每个肿瘤患者。

研究已表明，NK细胞在体外和体内都具有杀伤骨髓瘤（MM）等肿瘤的作用。本研究建立了国内领先的体外扩增NK细胞的培养体系，能有效地扩增健康人、骨髓瘤、肾癌、乳腺癌患者外周血NK细胞；阐明了扩增后NK细胞上调细胞表面表达杀伤细胞活化受体NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46，使其抗骨髓瘤活性显著增强；明确了扩增后NK细胞和蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合应用具有协同增强NK细胞杀伤骨髓瘤作用。阐明了体外扩增的NK细胞对白血病细胞系、肾癌细胞系和乳腺癌细胞系也具有强效的杀伤作用；首次阐明了组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠通过细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路，上调骨髓瘤细胞表面NKG2D配体表达（例如MICA/B、ULBP2），增强NK细胞杀伤骨髓瘤细胞作用，为临床应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂治疗骨髓瘤提供了实验依据。我们研究了第二代蛋白酶体抑制剂卡非佐米和组蛋白脱乙酰酶抑制剂伏立诺他对诱导T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat细胞凋亡作用的影响，发现卡非佐米和伏立诺他协同诱导Jurkat细胞凋亡，其诱导凋亡的主要机制为细胞活性氧（ROS）生成增加，伴随着线粒体电位的下降，细胞色素c的释放，caspase-3、caspase-9的激活和PARP蛋白的剪切。本研究为NK细胞治疗骨髓瘤、白血病、肾癌、乳腺癌等肿瘤的提供了理论依据，具有临床应用前景。.本项目按原计划书全部顺利完成，达到预期研究成果。已发表论文13篇，其中SCI论著5篇，SCI影响因子合计14.47，单篇最高影响因子5.47。发表论文摘要4篇。参加国内学术交流6次，大会发言3次，参加国际学术交流1次。培养研究生4名。