活化自然杀伤细胞治疗多发性骨髓瘤的研究

自然杀伤(NK)细胞具有抗肿瘤、抗感染和免疫调节等作用。异源反应性NK细胞能介导有效的抗骨髓瘤(MM)作用。我们前期研究证实：NK细胞治疗广泛复发MM患者是有效、可行和安全的，能使50%患者达到(接近)完全缓解；蛋白酶体抑制剂可下调HLA-I类分子在MM细胞表面的表达，并显著增强NK细胞对其杀伤作用；且预试验还发现：通过体外扩增，能使NK细胞数量增加和活性显著增强。本课题拟应用人外周血单个核细胞和辐照后的基因修饰K562细胞株共培养，研究培养过程中，各细胞成分的变化；从细胞和分子等不同分析水平，研究扩增前后NK细胞生物学行为改变，及其与抗MM活性的相关性；研究扩增后的NK细胞在抗MM中的分子机制及意义；进一步探讨联合应用蛋白酶体抑制剂等活化NK细胞的不同策略在骨髓瘤免疫治疗中的机制与意义。为MM及其他NK细胞敏感肿瘤的治疗新途径提供可靠实验依据及新的思路和方法。

NK细胞治疗虽然能改善多发性骨髓瘤（MM）等肿瘤的治疗疗效，但是由于NK细胞来源少和抗肿瘤活性低等原因限制了其在临床上应用。本研究建立了国内领先的体外扩增健康人NK细胞约150倍的高效扩增体系；研究了扩增前和扩增后NK细胞的抗MM活性及其机制，结果发现：扩增后NK细胞活化性受体的表达较扩增前NK细胞显著上调，扩增后NK细胞杀伤U266细胞株和患者骨髓瘤细胞的作用显著地增强；我们观察了蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合扩增NK细胞对骨髓瘤细胞的杀伤作用，结果发现：两者联合应用有协同增强NK细胞抗骨髓瘤活性；探讨了体外扩增肾细胞癌患者自体NK细胞的方法，结果表明：基因修饰的K562细胞联合IL-2在体外能有效扩增肾癌患者NK细胞，扩增后NK细胞对肾癌786-O细胞的杀伤作用显著增强；TRAIL参与NK细胞对机体的免疫监视，通过研究TRAIL 在三氧化二砷诱导骨髓瘤细胞凋亡中的作用及机制，结果发现：三氧化二砷能下调c - Myc和磷酸化-Rb，同时上调p53和p21Cip1和p27Kip1蛋白，从而导致骨髓瘤细胞在G2 / M细胞周期的停滞和细胞生长的抑制。同时上调干扰素调节因子1和TRAIL mRNA水平，增强caspase 8和caspase 3蛋白表达，诱导骨髓瘤细胞凋亡；研究了蛋白酶体抑制剂lactacystin对NK细胞杀伤骨髓瘤细胞的调控作用，结果发现：Lactacystin能使骨髓瘤细胞表面抑制性受体的配体HLA-class I表达下降，从而增强NK细胞对骨髓瘤细胞株和患者原代骨髓瘤细胞的杀伤作用；我们系统观察了组蛋白脱乙酰基转移酶抑制剂丙戊酸钠（VPA）对NK细胞杀伤骨髓瘤细胞的调节作用，结果发现：丙戊酸钠通过细胞外信号调节激酶上调骨髓瘤细胞表面NKG2D配体表达，从而增强NK细胞对其杀伤作用，为临床免疫治疗骨髓瘤提供了实验依据。本研究建立了国内领先水平的体外扩增NK细胞实验系统，为骨髓瘤和肾癌等NK细胞敏感肿瘤的治疗提供了新的思路和方法，有较好的临床应用前景。. 本项目按原计划书全部顺利完成，取得了预期研究成果，达到国内领先水平。已发表论文10篇，其中SCI论著3篇，SCI影响因子合计11.255，单篇最高影响因子5.946；发表会议论文摘要7篇；培养研究生3名。