沉默microRNA-134对癫痫持续状态后线粒体稳态的影响

The maintenance of mitochondrial homeostasis plays a vital role in protecting the structural and functional integrity of the nerve cells.It is of key importance to improve the patients statusepilepticus injury.Silencing miRNA-134 has demonstrated the effective therapy to protect the brain and it has been used in wide range of field.The potential mechanisms of miRNA-134 on mitochondrial homeostasis following statusepilepticus injury are still unclear.Our recent study has shown that Inhibition of the mitochondrial apoptosis pathway can reduce hippocampal neuron loss caused by status epilepticus, and can promote nerve cells mitochondrial "freshman". And silencing miRNA-134 can improve mitochondrial function and cell apoptosis after status epilepticus.Therefore,we investigate the effects of miRNA-134 on neural cells＇mitochondrial homeostasis, outcome of nerve cells and neuroethology using the model of status epilepticus model in rats. Furthemore, we clarify whether silencing miRNA-134 can regulate mitochondrial homeostasis via limk/cofilin signaling pathway.It will provide the important evidence for clinical neuroprotective therapy.

线粒体稳态的维持对保持神经细胞结构和功能的完整性至关重要，进而对改善癫痫患者神经功能及远期预后起着关键作用。沉默microRNA-134被证实对癫痫后神经元损伤具有保护作用，具有广泛的应用前景，但其对癫痫持续状态后海马神经元线粒体稳态的影响及机制尚不清楚。研究发现，抑制线粒体凋亡途径可降低癫痫持续状态导致的海马神经元丢失，并可促进神经细胞线粒体“新生”，而沉默miRNA-134可改善癫痫持续状态后线粒体功能及细胞凋亡。因此，本研究通过建立的大鼠癫痫持续状态损伤模型，在体内研究miRNA-134对神经细胞线粒体稳态（数量、形态、结构），细胞凋亡和神经行为学的影响，并进一步在体外实验阐明沉默miRNA-134是否通过limk /cofilin信号通路调控神经细胞线粒体稳态。深入探讨miRNA-134对癫痫持续状态损伤的作用及关键机制，从而为临床癫痫保护方案的制定提供重要的理论依据。

线粒体稳态的维持对保持神经细胞结构和功能的完整性至关重要，进而对改善癫痫患者神经功能及远期预后起着关键作用。沉默microRNA-134被证实对癫痫后神经元损伤具有保护作用，具有广泛的应用前景，但其对癫痫持续状态后海马神经元线粒体稳态的影响及机制尚不清楚。因此，本研究通过建立的大鼠癫痫持续状态损伤模型，在体内研究miRNA-134对神经细胞线粒体稳态（数量、形态、结构），细胞凋亡和神经行为学的影响，深入探讨miRNA-134对癫痫持续状态损伤的作用及关键机制，从而为临床癫痫保护方案的制定提供重要的理论依据。本实验建立大鼠癫痫持续状态损伤模型，并应用miR-134拮抗剂沉默miR-134，进而在体内水平上观察沉默miR-134对癫痫大鼠神经行为学、脑损伤及海马齿状回苔藓纤维出芽的影响；对海马组织氧化应激水平的影响；对海马区神经细胞线粒体ATP水平及ROS产生的影响；并应用分光光度计法检测对海马区神经细胞线粒体呼吸链酶复合物：吸链酶复合物Ⅰ、吸链酶复合物Ⅱ、吸链酶复合物Ⅳ活性的影响；应用Real-Time PCR检测对海马组织中自噬相关基因Atg-5、LC3BⅡ、Beclin-1表达的影响；应用Western blot检测对海马组织中limk1、cofilin及自噬标志蛋白Atg-5、LC3BⅡ、Beclin-1表达的影响。其次，利用大鼠海马神经元，建立“癫痫神经元”模型，应用miR-134拮抗剂沉默miR-134，在细胞水平观察沉默miR-134对limk1、cofilin蛋白表达的影响。从而，评价沉默miR-134对癫痫持续状态损伤的治疗作用，并揭示其可能机制。 研究基本按计划进行，完成了沉默miR-134对癫痫持续状态后大鼠神经行为学、脑损伤、海马齿状回苔藓纤维出芽、海马组织氧化应激水平、海马区神经细胞线粒体功能及海马区神经细胞自噬影响的检测；同时，完成了沉默miR-134对癫痫神经元中limk1、cofilin蛋白表达影响的检测。同时，为验证miR-134是否通过调节limk1发挥癫痫治疗作用，研究中增加了应用miR-134模拟物过表达miR-134，观察过表达miR-134对limk1 mRNA及蛋白表达的影响的检测，并进一步采用双荧光素酶报告基因实验探讨miR-134与limk1 3'UTR是否存在相互作用。