泡球蚴Em95抗原多肽及其免疫特性的研究

在世界包虫病高发区之一的新疆，包虫病已经严重影响了牧区农牧民的身体健康和经济发展。本研究应用分子生物学技术，从已构建的新疆泡球蚴cDNA文库中，克隆泡球蚴95（Em95）抗原基因，构建Em95原核表达载体，表达重组蛋白，免疫动物制备多克隆抗体。运用噬菌体肽库技术，免疫富集法筛选随机肽库获得Em95模拟抗原表位多肽，单独或联合Em95重组蛋白免疫动物研究其免疫特性，测定免疫动物抗体水平、相应Th1/Th2型细胞因子水平及表达的变化，探讨其可能的免疫机制，为实现为牧区提供有效疫苗的最终目的奠定技术和物质基础和技术储备。

包虫病已成为影响我国西部地区农牧民身体健康和制约牧区经济发展的一个重要原因。新疆地区为肝泡状棘球蚴病的高发区，这种“类肝癌”的肝脏寄生虫病治疗极为困难，因此寻找有效的保护性抗原或抗原表位进行疫苗研制符合当前西部大开发政策的迫切需要。本研究从泡型棘球绦虫原头蚴克隆EM95抗原目的基因，构建pET30a -EM95原核表达质粒，表达重组抗原，免疫兔子获得多克隆抗体。用生物信息分析技术和分子生物学技术相结合的方法对EM95抗原优势表位的进行分析，发现其有5个T细胞表位和6个B细胞表位，进一步分析发现EM95抗原有三个T-B细胞联合表位。设计了包含一个T-B优势表位序列EM95-1片段和两个T-B优势表位序列EM95-2片段，构建这两个片段的重组原核表达载体，测序、分析，在原核表达系统诱导表达含不同表位的重组蛋白EM95-1和EM95-2，用其免疫小鼠，均能诱导小鼠免疫应答产生特异性抗体，并能影响Th1和Th2细胞因子的改变。在抗感染实验中发现能够引起宿主囊重湿重抑制率减低，具有一定的保护性作用。