miR-571下调促进乳腺癌细胞增殖的机制

Previously, we have demonstrated that FLOT1 was markedly upregulated in breast cancer, and overexpreion of FLOT1 drmantically induced breast cancer proliferation and tumorigenicity via downregulation of the transcriptional activity of FOXO3a (Clin Cancer Res. 2011; 17:3089-99). Through analysis of microRNA chip assay, we found that miR-571 was significantly downregulated in breast cancer tissues compared with normal breast tissues. Furthermore, overexpressed miR-571 inhibited the proliferation of breast cancer cells,induced G1/S arrest and enhanced the transcriptional activity of FOXO3a. Bioinformatic analysis revealed that miR-571 might target several key competents of lipid rafts, including FLOT1, FLOT2 and caveolin1. In the current project, we aim to employ immunobloting, immuno-fluorence staining and luciferase reporter assays in both in vivo and in vitro systems, and use clinical samples to further investigate the mechanisms by which miR-571 inhibits the proliferation of breast cancer cells, which may provide new biomarkers and targets for the diagnosis and treatment of breast cancer.

前期研究我们已证明，FLOT1蛋白在乳腺癌中的表达显著上升，并且可下调FOXO3a的转录活性并促进乳腺癌细胞恶性增殖（已发表, Clin Cancer Res.)。采用microRNA芯片技术，我们发现miR-571在乳腺癌组织中表达降低。生物学实验结果表明：高表达miR-571可显著抑制乳腺癌细胞增殖，促使细胞G1/S停滞，并且上调FOXO3a表达。生物信息学预测显示：miR-571可直接抑制FLOT1、FLOT2及caveolin1等脂筏关键蛋白的表达。 因此，本项目将承上启下，以过表达或抑制miR-571的细胞为模型，通过免疫印迹、免疫荧光染色及荧光素酶报告基因分析等方法，研究miR-571抑制细胞增殖的分子机制，探讨miR-571下调FLOT1、FLOT2及caveolin1/抑制AKT激酶活性/促进FOXO3a的转录活性的具体机制。并与临床相结合，为乳腺癌的诊治提供新的分子靶标。

脂筏蛋白FLOT1已被证明在肿瘤发生发展中发挥重要作用。我们前期已发表文章证明FLOT1 蛋白在乳腺癌中的表达显著上升，并且可下调FOXO3a 的转录活性并促进乳腺癌细胞恶性增殖（Clin Cancer Res.)。近期，在研究FLOT1结合蛋白PTOV1和SRPK1的过程中，我们发现：(1). SRPK1在乳腺癌细胞系和组织高表达。进一步在132例临床乳腺癌组织中通过免疫组化检测SRPK1的表达水平，研究团队发现SRPK1在乳腺癌组织中高表达，与乳腺癌的临床分期显著相关（P<0.001），并与TNM分期相关（P<0.05）。SRPK1表达水平与患者整体生存显著负相关，并且可作为乳腺癌患者预后的独立指标（Med Oncol. 2014; 通讯作者）。(2). PTOV1基因通过募集HDAC1/2抑制DKK1基因的转录，从而促进Wnt/β-Catenin信号通路的持续性激活，并增强乳腺癌细胞的干细胞样特性以及肿瘤生长和转移。该研究发现了肿瘤细胞通过自分泌调控DKK1因子的表达从而维持自身Wnt/β-Catenin信号通路的持续性激活，并且提示了靶向PTOV1可能成为新型的治疗手段（J Pathol. 2016）。项目研究期间共发表SCI文章2篇。培养研究生2名。