TF-PAR2通路在血管损伤后炎症反应中的作用

Intimal hyperplasia (IH) and the inflammation are recognized as the key steps of the formation progression of atherosclerosis . Inhibition of the inflammatory response of vessel wall thereby inhibiting the migration and proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) is an important means to prevent IH. Tissue factor (tissue factor, TF) is a transmembrane glycoprotein with an active seven factor (FVIIa) to form complexes, mediated vascular local coagulation process, stimulating the secretion of inflammatory cytokines, and to participate in the IH process. PAR2 receptor is an important TF: FVIIa binding downstream pathway, which is upregulated in atherosclerotic plaque and VSMC. But whether raised PAR-2 mediated VSMC inflammatory response, thus affecting the VSMC function is not clear . The key role of our project is inhibit TF and / or PAR2 expression in VSMC to analysis the TF: FVIIa-PAR2 pathway mediated inflammatory reaction in the atherosclerotic process, then confirme in PAR2-/ - mouse model.

内膜增生（IH）和炎症反应被公认为动脉粥样硬化形成和进展的关键步骤，抑制血管壁的炎症反应从而抑制血管平滑肌细胞（VSMCs）的迁移和增殖，是预防IH的重要手段。组织因子 (tissue factor, TF) 是一种跨膜糖蛋白,与活性七因子（FVIIa）结合形成复合物, 介导了血管局部凝血过程、刺激炎症因子分泌，并参与了IH的过程。PAR2受体是TF：FVIIa结合后的主要下游通路，在动脉粥样斑块和VSMC中表达上调，但上调的PAR-2是否介导了VSMC的炎症反应，从而影响VSMC功能，目前尚不清楚。本课题通过分别抑制VSMC TF和／或PAR2表达, 分析TF:FVIIa-PAR2通路介导的炎症反应在动脉粥样硬化过程中的关键作用，在PAR2-/-小鼠模型中进一步证实，并探讨下游信号通路。为寻找抑制动脉粥样硬化的新靶点提供理论依据。

炎症和氧化应激在血管内膜增生（IH）和心肌缺血再灌注损伤（I/R）中起重要作用。蛋白酶激活受体2（PAR2）广泛分布于心血管系统的多种细胞，是血管损伤后组织因子 (TF) 与活性七因子（FVIIa）结合形成的复合物的主要下游通路，在动脉粥样斑块、VSMC和缺血损伤后心肌中表达上调。因此研究在IH和I/R中，TF-PAR2通路如何介导炎症和氧化应激，具有十分重要的意义。1.我们应用PAR2基因敲除（PAR2-/-）小鼠，通过股动脉钢丝损伤构建血管损伤模型，证实损伤后PAR2-/-小鼠IH明显减少。经TF的天然配体FVIIa刺激后，培养的PAR2-/-小鼠VSMC的迁移能力较C57BL/6小鼠VS MC明显下降。信号通路研究证实FVIIa刺激后经由PAR2介导使ERK磷酸化上调而影响了VSMC的迁移能力。继而我们通过siRNA构建了TF低表达的PAR2-/-小鼠VS MC（Low TF PAR2-/- VSMC），其迁移能力有进一步下降。同时，FVIIa可明显上调C57BL/6小鼠VSMC的 IL-6分泌，而PAR2-/-和low TF PAR2-/- VSMC的IL-6的分泌较对照组明显下降。研究证实了PAR2在IH中的重要作用，FVIIa诱导的VSMC迁移及炎症反应由PAR2介导，其下游为ERK通路。2.我们也对PAR2在心肌缺血再灌注（I/R）中的作用做了初步探讨。证实了PAR2-/-可以减少小鼠I/R后的心肌梗死面积，保护心功能。I/R后PAR2-/-小鼠心肌的IL-6、TNF mRNA水平下调。在培养的H9C2细胞中通过siRNA抑制PAR2构建了PAR2 低表达的H9C2细胞，经缺氧复氧实验模拟I/R过程，证实PAR2 低表达可以抑制H9C2细胞的氧化应激反应。 3.我们也对动脉粥样硬化人群中的氧化应激状态作了一些研究。人体内的PAR2水平难以测定，而PAR2参与了脂肪细胞的氧化应激，血清过氧磷酶1（Paraoxonase 1）水平与高脂血症、冠状动脉粥样硬化、高血压时的氧化应激水平有密切关系。我们的研究发现吸烟人群和糖尿病人群的血清PON1活性降低，吸烟和糖尿病是PON1活性降低和颈动脉粥样硬化的独立危险因子。而在心血管疾病高危人群中，血清同型半胱氨酸（HCY）水平与血清PON1活性负相关，且与颈动脉粥样硬化的发生有关。