基于CRS的“怒伤肝”大鼠即早基因表达与信号传导通路机制研究

According to the three kinds of "anger injured liver" model method（Rats upside down the environment day and night,Wrath after destroying bilateral diaphragmatic area，Vertical bondage of double hind legs）, the “Openfield” evaluation was used to improve the "anger injured liver" model;by detecting the expression of the early gene in the brain region of rats with "anger injury liver" and the expression changes of CRH, ACTH and ACTH receptor messenger RNA and the changes of immune function in the signal transduction pathway.With the intervention of Xiaoyao Powder, the expression of early gene and the effect mechanism of signal transduction pathway in the brain region of different periods of stress and Chinese medicine intervention were studied.It is an important extension to the rough set theory that the generalized rough sets cover the partition of the equivalence relation of rough sets as coverage.Based on rough set data mining technology, we analyzed the relationship between the expression of early genes and the effect of signal transduction pathways, and the changing rules on "anger injured liver" rats.According to the results of data mining, combined with the knowledge of TCM syndromes, we can reasonably interpret and evaluate the extracted syndromes knowledge, and establish a scientific evaluation system based on covering rough set data mining technology and TCM syndrome research.

课题对大鼠昼夜颠倒环境、破坏双侧膈区后怒行为、双后肢立式束缚三种“怒伤肝”造模方法，采用Openfield评价，完善“怒伤肝”模型；通过检测“怒伤肝”大鼠脑区即早基因的表达及信号传导通路中CRH、ACTH、ACTH受体信使RNA的表达变化以及免疫功能的改变，用逍遥散加以干预调节，研究在应激及中药干预不同时段脑区即早基因的表达及信号传导通路效应机制；覆盖广义粗糙集将粗糙集等价关系确定的划分推广为覆盖，是对粗糙集理论的一种重要扩展。课题采用先进的基于粗糙集的数据挖掘技术，分析“怒伤肝”大鼠即早基因的表达及信号传导通路效应间的关联关系以及变化规律，根据数据挖掘的结果，结合中医证候专业知识，对所提取的证候分类知识进行合理的解释与评价，建立一套基于覆盖粗糙集数据挖掘技术和中医证候研究相关的科学评价体系。

七情致病论被称为中医学的精华，其中“怒”是最为常见的情绪之一，而“怒伤肝”既是情志内伤病因病机学说的基础理论，也是现代中西医结合研究的热点。“怒伤肝”是指愤怒、焦虑、抑郁等不良情绪长期或短期亢进对中医藏象“肝”的生理功能造成影响，形成“肝失疏泄”的病理状态。中医七情致病论与现代心理应激学说有高度一致性，两者都从机体的心理性、生物性以及外部应激源因素进行多层次分析情绪的致病机理。逍遥散作为抗怒应激的首选方药，其被广泛应用于现代心身医学划分的情绪应激相关疾病中，能对应激导致的内稳态破坏起到良好的治疗作用。本研究旨在利用慢性应激方法制作“怒伤肝”动物模型，对其进行分组处理，观察“怒伤肝”大鼠即早基因表达的变化，以及神经内分泌免疫变化及其对下丘脑-垂体-肾上腺轴、蓝斑-交感-肾上腺髓质介导的介质反应的调控作用；探讨免疫调控受体TIGIT及其配体CD155、PDCD5在“怒”模型大鼠胸腺细胞及外周血单个核细胞中的表达情况，观察大鼠胸腺细胞中T细胞免疫球蛋白水平及血清CRH、ACTH、IL-2、IL-10水平，分析这些指标与免疫功能的相关意义；观察逍遥散对愤怒心理应激条件下行为、内分泌、免疫调节与信息传导作用，基于传导通路筛选相关下游基因进行验证，探索“怒伤肝”应激形成的机制以及逍遥散抗应激损伤的途径。结果发现模型组大鼠脑组织c-fos、c-jun、c-fosmRNA、c-junmRNA表达升高，GABAAmRNA表达下降，孕酮水平下降，脑组织NE、5-HT、5-HIAA、DA及DOPAC上升，海马NE、DA含量下降，5-HT含量上升，胸腺皮质部呈不同程度的组织结构损坏，凋亡现象增多，TIGIT和PDCD5蛋白表达上升，CD3+、CD4+T细胞亚群表达水平下降，CD8+T细胞亚群表达水平上升，CRH、ACTH、IL-10、CORT含量上升，IL-2含量下降。逍遥散可通过回调LOC103692165、Pf4、LOC103694855、Hbb、Slc25a22这些基因表达水平起到抗怒应激的作用。c-fos、c-jun为即早基因，孕酮、GABAA、5-HIAA、DOPAC、TIGIT/CD155、PDCD5、CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群、CRH、ACTH、IL-2、NE、DA、5-HT、CORT、IL-10为大鼠神经-内分泌-免疫功能的反映，且各关键数据与实验结论均相符。