邻苯二甲酸二乙基己酯对卵泡生长发育的影响及其机制研究

The effects of environmental chemicals on female reproductive become the focus of attention. DEHP causes serious pollution of the environment and has a great effect on male reproductive system, and the mechanisms were clear. However, the effects on female reproductive system have been little reported yet. Follicle development is one of the most important things for female reproductive system. Therefore, this study aimed to explore the effects of DEHP on follicle development through oocyte mature and DNA methylation. Furtheremore, we will study the mitochondria and enzyme including MPF and MAPK to find out the mechanism for follicle development. The expected result of this study is to deepen the understanding of the effects of environmental chemicals on female reproduction, especially on the follicle development, and to provide further theoretical basis for the DEHP toxity prevention.

环境化学物对女性生殖系统的影响越来越引起人们的重视。邻苯二甲酸二乙基己酯作为广泛使用的化工原料已造成严重的环境污染。它对男性生殖系统的损害作用及机制已经比较明确，对女性生殖系统影响的研究少有报道。卵泡的正常生长发育是女性正常生殖功能的重要标志之一，也是女性生殖系统的敏感靶点之一。本项目通过研究邻苯二甲酸二乙基己酯对卵母细胞成熟和对卵母细胞中线粒体、成熟促进因子及丝裂原激活蛋白激酶的影响，研究其对卵母细胞成熟的影响，探讨其作用于卵母细胞的靶点和机制。同时，亦希望通过研究邻苯二甲酸二乙基己酯对各级卵泡细胞DNA甲基化水平的调节，探讨其可能影响卵泡生长发育的表观遗传学机制，明确该环境化学物的女性生殖毒性。项目研究的预期成果有利于深化认识环境化学物对女性生殖系统的影响，尤其是对卵泡生长发育的影响；并为邻苯二甲酸二乙基己酯的女性毒性防治提供进一步的理论依据。

背景：邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)作为广泛使用的化工原料不仅造成了严重的环境污染，并且对人类健康造成威胁。本项目研究探讨了邻苯二甲酸二乙基己酯对女性生殖系统尤其是卵巢的影响。研究内容：卵巢是女性生殖系统主要组成部分，而卵泡的正常生长发育是女性正常生殖功能的重要标志之一,也是女性生殖系统的敏感靶点之一。本项目研究内容包括: 1, DEHP对小鼠卵巢细胞凋亡和成熟促进因子的影响（包括mRNA表达，蛋白表达，DNA甲基化水平）。2, DEHP和其代谢产物邻苯二甲酸-单-乙基己基酯 (MEHP) 对小鼠卵母细胞成熟和对卵母细胞中线粒体的影响；MEHP对小鼠卵母细胞成熟促进因子CDK1, CCNB1及Cdc25b的影响。 研究结果：1，低剂量染毒DEHP，与对照组比较，小鼠卵巢成熟影响因子Kit，KitL，Gdf9和ATM mRNA均上升（p<0.05），但各因子DNA甲基化变化与对照组比较无统计学差异。表明一定剂量的DEHP对未成年小鼠卵巢具有毒性作用，促进其发育，其机制可能并不是通过DNA甲基化的改变。2，小分子RNA Let-7b，microRNA17-5p，microRNA-26b，microRNA212，microRNA181a随着染毒剂量的增加，与对照组比较，均有所下降（p<0.05），表明DEHP对卵巢具有毒性作用，促进其发育。此项结果与成熟促进因子结果一致。3，DEHP对小鼠卵巢细胞凋亡的影响结果表现为染毒DEHP后，低中剂量染毒组caspase3和FADD mRNA与对照组比较具有明显差异（p<0.05），但电镜下高剂量组未见凋亡小体随着染毒剂量的增加。4，DEHP和MEHP均抑制了小鼠卵母细胞生发泡的破裂，第一极体的释放，促进了卵母细胞的死亡，但并未影响卵母细胞线粒体的变化。5，高剂量染毒MEHP后小鼠卵母细胞成熟促进因子CDK1 mRNA下降，与对照组比较差异具有统计学意义（p<0.05）；各剂量染毒组CCNB1和Cdc25b mRNA均下降，与对照组比较具有统计学意义（p<0.05）。科学意义：本项目研究结果表明DEHP对小鼠卵巢细胞具有毒性作用，较低剂量下能够促进小鼠卵巢的成熟，其可能机制是影响成熟促进因子的表达释放。同时，DEHP及其代谢产物MEHP抑制了小鼠卵母细胞的成熟，其可能的机制之一是抑制小鼠卵母细胞成熟促进因子的表达。