缺血性脑卒中相关的MiR-17-92家族基因的筛选及分子机制研究

Ischemic stroke (IS) is a common cerebrovascular disease which is seriously harm to middle age and old people health, however, its etiology and pathogenesis have not yet fully understood. MiR-17-92 gene cluster is a novel gene which may be involved in ischemic stroke, but its mechanism involved in the incidence of ischemic stroke is not clear.In the previous National Natural Science Foundation study, Our scientific research group from the molecular epidemiology have been performed to investigate the association between single nucleotide polymorphisms (SNPs) and copy number variation (CNV) in some encoding genes and susceptibility to ischemic stroke. Nevertheless, not involved in the genetic variants in non-coding genes such as MiR-17-92 gene cluster, especially in the promoter region of MiR-17-92 gene cluster.In this study, we plan to examine the relationship between SNPs and CNV in the promoter region genetic variation of miR-17-92 gene cluster and risk of ischemic stroke by conducting case-control and experimental studies. We aim to provide evidence to clarify the role of the SNPs and CNV in the promoter region of miR-17-92 gene cluster playing in the development of ischemic stroke,and provides the research foundation for the gene diagnosis and prevention of ischemic stroke.

缺血性脑卒中(Ischemic stroke，IS)是严重危害我国中老年人的一种常见的脑血管疾病，然其病因和发病机制尚未完全阐明。MiR-17-92基因簇是新近发现的可能是参与IS发生的一种新基因，但他通过何种机制在IS中起作用尚不清楚。在已结题的国家自然科学基金前期研究中，我们课题组从分子流行病学调查了部分编码基因中的单核苷酸多态性（SNPs）和拷贝数变异（CNV）与IS的易感性，但尚未涉及非编码基因miR-17-92 基因簇，尤其是发生在miR-17-92 基因簇启动子区的遗传变异。本研究拟联合使用SNPs和CNV 两个遗传学标记，运用病例-对照及功能实验探索miR-17-92 基因簇启动子区遗传变异与缺血性脑卒中发病的关联，旨在为阐明miR-17-92 基因簇启动子区SNPs 和CNV 在缺血性脑卒中发生发展中的作用提供理论依据。从而为缺血性脑卒中的基因诊断和疾病的预防奠定基础。

目的：（1）研究miR-17-92基因簇启动子区rs1491034T/C、rs9515692C/T、rs9301654A/G、rs1352743A/G、1813389A/G和rs982873T/C多态性与缺血性脑卒中遗传易感性的关系。（2）检测人外周血单个核细胞miR-17-92基因簇的表达情况，分析7个位点SNP与miR-17-92基因簇表达的关系。方法：（1）用SNaPshot SNP分型技术和DNA测序法检测397例广西正常人群和398例缺血性脑卒中患者miR-17-92基因7个位点SNP基因型。（2）用反转录实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测人外周血单个核细胞miR-17-92基因簇的表达情况。结果：（1）广西人群rs9301654 A/G位点在对照组和缺血性脑卒中组中均存在AA、GA和GG三种基因型；与AA基因型比较，携带GA和GG基因型的个体患缺血性脑卒中的风险显著降低（P<0.05）。（2）与A等位基因比较，携带G等位基因的个体患缺血性脑卒中的风险显著降低（P<0.05）。（3）模型分析表明，显性模型（GA+GG vs. AA）和隐性模型（GA+AA vs. GG）均显著降低了缺血性脑卒中的发病风险（P<0.05）。（4）单倍型分析结果表明，ACGC单倍型携带者缺血性脑卒中发病风险显著降低（P<0.05）。（5）缺血性脑卒中组外周血单个核细胞miR-17-5p的表达显著高于对照组（P=0.021），而miR-19a-3p的表达则显著低于对照组（P=0.004）。进一步分析发现，缺血性脑卒中组rs9301654GA 或 GG基因型携带者外周血单个核细胞miR-19a-3p的表达显著低于AA基因型携带者（P<0.05）。结论：（1）rs9301654A/G位点GA和GG基因型、显性模型和隐性模型以及ACGC单倍型在缺血性脑卒中发病中起到保护作用。（2）缺血性脑卒中组外周血单个核细胞miR-17-5p和miR-19a-3p的表达水平与对照组比较存在显著差异，可能是缺血性脑卒中潜在的生物学标志或治疗靶标。（3）rs9301654A/G多态性可能通过下调miR-19a-3p的表达从而在缺血性脑卒中的发病中起到保护作用。