鹰嘴豆植物雌激素活性成分干预乳腺癌研究

鹰嘴豆是一味维吾尔族民间药和传统中药，具有抗癌、降血糖、降血脂等多种.生物功能，推测与含有的异黄酮类植物雌激素活性成分密切相关。在本研究中，我们将对鹰.嘴豆进行提取、分离和纯化；利用以雌激素受体为靶点、荧光素酶为报告基因的细胞筛选系统对鹰嘴豆中植物雌激素活性成分进行初步筛选；再通过MTT 法和流式细胞技术对鹰嘴豆中植物雌激素活性成分诱导乳腺癌细胞凋亡进一步研究；最后，构建乳腺癌小鼠模型，通过研究鹰嘴豆中植物雌激素活性成分对乳腺癌肿块缩小及对转移肿块的减少来对乳腺癌的干预进行探讨。通过本研究，将对鹰嘴豆的植物雌激素生物活性成分做一科学评价，并对其干预乳腺癌的发生发展提供药理依据；此外，将对鹰嘴豆作为中药的临床使用提供科学资料，对鹰嘴豆功能因子的开发提高理论依据，对鹰嘴豆农业及医药推广开拓广阔市场。

本项目研究了鹰嘴豆（芽）作为一味维吾尔族民间药和传统中药，其异黄酮类植物雌激素组分对乳腺癌的化学预防功能。首先对鹰嘴豆（芽）通过乙醇提取、过滤浓缩、柱层析等步骤进行提取、分离，获得鹰嘴豆（芽）部位提取物；然后利用雌激素受体为靶点、荧光素酶为报告基因的细胞筛选系统对所获得的提取部位进行类雌激素活性筛选，发现鹰嘴豆（芽）异黄酮组分是具有高活力的植物雌激素活性组分；瞄准鹰嘴豆芽植物雌激素活性组分，通过MTT 法、流式细胞测定、RT-PCR以及Western Blot对鹰嘴豆中植物雌激素活性成分在细胞核分子水平上对其诱导乳腺癌细胞凋亡进一步研究；最后，制备乳腺癌SD大鼠模型，通过研究鹰嘴豆中植物雌激素活性成分对乳腺癌发生延迟及对转移肿块的减少来对乳腺癌的干预进行探讨。结果发现，在分子水平上，鹰嘴豆芽异黄酮不仅能够激活雌激素受体应答序列(ERE) 调控下的荧光素酶报告基因的活力，而且促进了雌激素受体下游靶基因pS2和PR基因的转录激活以及碱性磷酸酶AP的蛋白表达,表明鹰嘴豆芽异黄酮通过雌激素受体ERα促进雌激素敏感细胞增殖的类雌激素活性。在细胞水平上，我们发现鹰嘴豆中植物雌激素组分抑制了几种不同雌激素受体背景的乳腺癌细胞如MCF-7(ERα+,ERβ+)、SKBr3(ERα-,ERβ-)的生长，且其抑制作用是通过雌激素受体独立的途径进行的。并首次发现鹰嘴豆芽异黄酮对乳腺癌细胞的抑制作用是通过线粒体介导的凋亡因子Caspase-7和Caspase-9以及肿瘤抑制因子P21和P53参与的凋亡信号转导途径进行的。在动物水平上，我们制备了苯蒽类化合物 DMBA 诱导的乳腺癌SD大鼠模型，结果证明低、高剂量的鹰嘴豆植物雌激素活性组分对大鼠乳腺癌发生具有延迟作用，并显著减少了乳腺肿瘤的数目，免疫组化结果也证明了ICS对显著增加了肿瘤组织的坏死结构。.本项目对鹰嘴豆的植物雌激素生物活性成分做一科学评价，并对其干预乳腺癌的发生发展提供药理依据；此外，将对鹰嘴豆作为中药在防治乳腺癌的临床使用提供了科学资料；对鹰嘴豆功能因子的开发提供了理论依据，对鹰嘴豆农业及医药推广提供了广阔的市场前景。