基于IL-2基因表观遗传修饰研究衰老大鼠免疫失衡机制及补肾方药作用

本课题基于中医肾气不足、阴阳失衡是衰老的重要病因病机，及现代医学免疫衰老中免疫稳态失衡的理论，结合国内外有关免疫因子表达的表观遗传学修饰研究新进展，应用不同年龄大鼠（青、中、老年）为实验动物，着重从IL-2基因表观遗传学修饰角度，观察皮质酮的增龄性变化对胸腺细胞GR、IL-2、IL-2R、NF-κB、甲基化酶（DNMT）、甲基结合蛋白（MeCP2）、乙酰化酶（HAT）、IL-2基因启动子CpG岛甲基化、组蛋白乙酰化及以上各因素间交联的动态变化对CD4+T细胞分化（Th1、Th2、Th17、Treg）的影响，及补肾、益气方药（左归丸、加减益气聪明汤）对上述衰老大鼠IL-2基因表观遗传学修饰相关各项指标的作用，以深入探索皮质酮的增龄性变化对IL-2基因表观遗传学修饰与免疫稳态影响的分子机制，为临床运用补肾、益气法调整免疫稳态，延缓衰老提供深层次的科学实验依据，具有重要的理论意义和应用价值。

课题组按照标书合同规定，在既定的时间节点内，以自然衰老大鼠为研究对象，补肾益气方和左归丸为用药，应用western blot, PCR, ChIP, MSP,激光共聚焦等技术，发现：1）在转录水平上，IL-2呈现增龄性下降的变化。补肾方药能有效升高IL-2 的表达。2） 随着衰老，血清GC含量增高，CD4+T细胞表达的GR降低。补肾方药能降低GC含量，减轻过高GC对靶细胞的损伤。3）老年大鼠CD4+T细胞对外界刺激（anti-CD3联合anti-CD28）的敏感性下降，使细胞内NF-κ B核转位能力减弱。补肾益气方药能通过活化衰老CD4+T细胞NF-κ B的核转位，增强NF-κ B与IL-2基因的结合，这可能是补肾方药促进IL-2表达的机制之一。4） 老年大鼠CD4+T细胞中DNMTs活性增高，促使IL-2基因启动子区域特定CpG位点过度甲基化。补肾方药能降低DNMTs活性，下调CpG位点甲基化程度，从而增强IL-2基因表达。以上结果为阐明补肾方药延缓衰老进程中细胞免疫功能下降的机制。. 相关结果已发表标注文章包括：SCI论文1篇，中文核心论文2篇，已录用中文核心论文3篇。另有1篇SCI论文在返修中。参加国际会议报告1次，全国会议报告4次。参与培养博士研究生1名， 7年制学生2名。. 根据文献的最新报道，实验中将原标书中的组织来源（胸腺细胞）改为CD4+T细胞，使研究对象更加深入和精细。改用ELISA法检测大鼠血清IL-2蛋白含量，相比WB法而言，具有定量精确等优点。