L-rhamnose修饰对肿瘤相关糖抗原疫苗效应的影响

肿瘤相关糖抗原（TACAs）疫苗作为肿瘤免疫治疗的新手段备受关注，已有多种TACAs疫苗进入临床实验。但是TACAs的免疫原性较差，加之肿瘤患者体内的免疫功能异常，有效增强抗原递呈细胞（APCs）对TACAs疫苗的摄取和递呈，就成为促进TACAs疫苗走向应用的关键举措。研究表明使疫苗与抗体结合，以免疫复合物的形式进行免疫，可明显促进APCs对疫苗的摄取。体外实施这一方法存在困难，而人体内大量天然的糖抗体为解决这一问题提供了可资利用的捷径。2009年发表的糖芯片研究结果表明，人血清中存在高丰度的抗鼠李糖（anti-rhamnose）抗体。本课题计划合成L-rhamnose(α/β)修饰的TACAs疫苗，建立小鼠模型，检测L-rhamnose修饰对TACAs疫苗效应的影响，期望借助人体天然anti-rhamnose抗体这一宝库，通过抗体介导的抗原递呈机制，有效提高TACAs疫苗的效能。

肿瘤相关糖抗原（TACAs）疫苗作为肿瘤免疫治疗的新手段备受关注，已有多种TACAs疫苗进入临床实验。虽然有些TACAs疫苗已经显示出较好的效果，但是TACAs的免疫原性较差，加之肿瘤患者体内的免疫功能异常，有效增强抗原递呈细胞（APCs）对TACAs疫苗的摄取和递呈，就成为促进TACAs疫苗走向应用的关键举措。研究表明，使疫苗与抗体结合，以免疫复合物的形式进行免疫，可明显促进APCs对疫苗的摄取。体外实施这一方法存在困难，人体内存在的大量天然鼠李糖（anti-Rhamnose）抗体为解决这一问题提供了可资利用的捷径。. 由于预实验表明，TACAs抗原的合成难度大、产量低，为了首先检验在Rhamnose介导下，anti-Rhamnose与肿瘤细胞的结合能力，我们首先合成并纯化了Rhamnose修饰的短肽Rhamnose-RGD。检测结果表明，在正常人血清（含anti-Rhamnose）存在的条件下，Rhamnose-RGD及RGD与肿瘤细胞的结合并未显示明显区别。原因可能为人血清成分复杂，存在多种干扰因素，而且所合成的线性RGD稳定性可能比较差。继之，我们采用另一种含有Rhamnose并且来源简单的结构---鼠李糖脂(Rhamnolipid)，将其通过一定方式与肿瘤细胞连接，体外检测正常人血清（含anti-Rhamnose和补体）对肿瘤细胞的补体介导细胞毒（CDC）效应。结果表明，在适当的作用条件下，补体系统可以有效杀伤Rhamnolipid修饰过的肿瘤细胞。. 由于人血清作为anti-Rhmnose的来源，虽然容易获得，但会因成分复杂干扰实验结果。于是我们对人血清中anti-Rhamnose进行了纯化，获得了高滴度的特异性抗体。之后采用自行合成的Rhamnose-OVA免疫小鼠，获得了anti-Rhamnose升高的小鼠模型。由于课题在实施过程中，发现TACAs疫苗的化学合成费时、费力，并且造价比较高，最终通过修改实验方案，合成了L-Rhamnose修饰的小鼠黑色素瘤B16肿瘤细胞疫苗，完成了其体内抗肿瘤实验，结果表明L-Rhamnose修饰可以有效提高肿瘤疫苗的效果。总之，本课题目前获得的研究结果充分提示，在Rhamnose的介导下，利用人血清中的anti-Rhamnose实现对肿瘤细胞的靶向杀伤和肿瘤细胞疫苗的免疫增强具有诱人的前景。