IL-6诱导的C/EBP调控Tmub1基因转录的分子机制

Tmub1是2005年发现的新基因，在大鼠肝切除术后肝细胞增殖中发挥重要作用,但目前Tmub1的调控机制尚不清楚。我们通过生物信息学技术并结合以前的研究结果，推测Tmub1可能受IL-6/JAK/STAT3/C/EBP信号通路的调控,并且通过其细胞核－细胞浆的穿梭运动调节肝细胞的增殖。因此我们拟通过CHiP、启动子报告基因、EMSA、细胞内微注射等分子生物学技术，研究：1.证明IL－6能刺激诱导Tmub1表达上调，促进肝细胞增殖;2.证明IL－6刺激诱导Tmub1表达上调是通过C/EBP介导;3.证明C/EBP与Tmub1结合后诱导Tmub1基因的表达上调,研究Tmub1表达上调与肝细胞增殖的关系;4.分析Tmub1上游C/EBP可能的结合位点，并确认C/EBP与Tmub1相应位点。证明Tmub1基因是传递肝细胞增殖信号和调控增殖相关蛋白表达的关键分子，从而进一步阐明肝细胞增殖的分子机制。

Tmub1 是 2005 年发现的新基因，在大鼠肝切除术后表达明显增加，但Tmub1 调控肝细胞增殖的机制以及Tmub1的基因表达调控机制都未见文献报道。方法：通过抑制Tmub1表达观察了Tmub1对肝细胞增殖的影响，并检测了Tmub1影响肝细胞增殖的可能机制；在IL-6诱导肝细胞增殖过程中，检测了IL-6对Tmub1表达的影响；采用生物信息及荧光素酶报告基因实验分析了可能参与Tmub1表达调控的转录因子；采用增强和抑制C/EBPβ表达观察了其与Tmub1表达的关系，采用CHIP实验验证了C/EBPβ能否与Tmub1启动子区序列结合，采用荧光素酶报告基因实验分析了Tmub1基因中C/EBPβ的可能结合序列。结果：1.Tmub1在肝细胞增殖过程中发挥负向调控作用，这种作用可能可Tmub1与CMAL、securin等分子发生作用有关；2. IL-6在促进肝细胞增殖的同时上调了Tmub1表达，这种作用可能和C/EBPβ、STAT3、AP-1等下游转录因子有关；3. C/EBPβ与Tmub1表达正相关，C/EBPβ可能通过与Tmub1基因直接结合调控Tmub1表达。结论：Tmub1是肝再生过程中的负向调控因子，其表达受IL-6调控，C/EBPβ可能是调控Tmub1表达的关键转录因子。