口腔黏膜下纤维性变癌变早期诊断分子标志物群的实验研究

At present, an important factor of limited early diagnosis of oral cancer and oral precancerous lesions is a lack of special molecular markers, screening molecular markers from liquid and cytoplasm have still methodological and sensitive limitation. This researchful subjective structures molecular marker group of early diagnosis and forewarn for malignant transformation of oral submucous fibrosis and relize new method of early diagnosis for malignant transformation of oral submucous fibrosis. Special molecular markers of malignant transformation will be screenned by microarray and multiple target evaluable system will be structured by biological information technology for looking for molecular marker group of early diagnosis of malignant transformation of oral submucous fibrosis and discovering every molecular marker which plays an important role and active mechanism in malignant transformation of oral submucous fibrosis. An original innovation will be obtained in structuring multiple target evaluable system,screenning molecular marker group and active mechanism of molecular markers for obtaining new informations in key mechanism of malignant transformation of oral submucous fibrosis and new method of early diagnosis of malignant transformation of oral submucous fibrosis.

目前，制约口腔癌及口腔黏膜癌前病变早期诊断的一个重要因素是特异性分子标志物的缺乏，而从体液与病变细胞质中筛选分子标志物又有方法学的问题和灵敏度的局限性。本研究项目提出建立口腔黏膜下纤维性变癌变分子早期预警与诊断的"分子标志物群"，实现口腔黏膜下纤维性变癌变早期诊断的新方法。本项目采用活版印生物芯片检测技术，高通量筛选口腔黏膜下纤维性变癌变特异性分子标志物；结合生物信息学分析方法，构建分子标志物多目标评价体系，寻找口腔黏膜下纤维性变癌变早期诊断"分子标志物群"， 用以揭示各分子标志物群在口腔黏膜下纤维性变癌变发生中所起的关键作用及其互相的作用机制。期待在分子标志物多目标评价体系的建立，"分子标志物群"的筛选、分子标志物互相的作用机理等方面取得原创性成果，为阐明口腔黏膜下纤维性变癌变关键机制提供新的信息，可望为口腔黏膜下纤维性变癌变的早期诊断开辟一条新的途径。

课题组利用Affymetrix 3’IV基因芯片，免疫组织化学（IHC）和Western Blot技术（WB），实时荧光定量核酸扩增检测系统和基因调控神经网络调控图，研究了OSF癌变组、非OSF口腔癌组及正常对照组血液和癌组织标本，筛查、构建OSF癌变的基因表达谱，通过全基因组水平对三者之间差异表达基因进行分析，共得到差异表达基因747个:其中上调基因179个,下调基因568个。GO分析显示：OSF癌变与免疫反应、炎症反应、细胞增殖及抗细胞凋亡等密切相关。Pathway分析证实了OSF癌变的基因通路与肿瘤信号、调节肌动蛋白细胞骨架、ECM受体、JAK-STAT及细胞周期通路相关。结合以上分析手段，参考大量文献最终筛选出特异性表达候选基因10个，其中上调基因5个，下调基因5个。.利用免疫组织化学（IHC）和Western Blot技术（WB），实时荧光定量核酸扩增检测系统和基因调控神经网络调控图，检测了10个候选基因在各组织标本中的分布及表达程度。对免疫组化及Western Blot的结果证实了10个候选基因在不同组中表达有统计学意义。PTPRZ1和CXCL1蛋白在OSF癌变的颊黏膜组织中阳性表达（P<0.05），TPM1蛋白在OSF癌变组及非OSF癌变鳞癌组织中的表达显著低于正常对照组（P<0.05）。WDR66和IL-8蛋白在OSF癌变组及非OSF癌变鳞癌组织中的表达显著高于正常对照组（P<0.05）。而蛋白印迹实验印证了免疫组化的实验结果。.实时荧光定量核酸扩增检测系统（QPCR）检测实验结果证实了基因表达与芯片数据分析结果一致；运用实验发现的特异性基因群，构建基因调控神经网络调控图。通过分析证实了口腔黏膜下纤维性变癌变生物学过程涉及炎症、免疫、粘附、细胞增殖分化调节、氧化还原等生物学过程密切相关。. 本研究通过对分子标志物多目标评价体系的建立，“分子标志物群”的筛选、分子标志物互相的作用机理的研究，初步取得了部分原创性成果，为阐明口腔黏膜下纤维性变癌变关键机制提供了新的信息，同时，也为口腔黏膜下纤维性变癌变的早期诊断开辟了新途径。