HSV-1激活HHV-8裂解性周期复制的分子机制

卡波济肉瘤（KS）发病后大多预后差、病死率高。目前公认的KS病原体为人类疱疹病毒8型（HHV-8），HHV-8复制周期的调节在KS发生发展中起关键作用。然而HHV-8感染并非KS发生的充分条件，其它协同因子在KS致病过程中发挥着重要作用，这些协同因子包括单纯疱疹病毒1型（HSV-1）。.申请者最近的研究表明（Cell Microbiol, 2008, 10:713）：HSV-1能够激活HHV-8裂解性周期复制；HSV-1使HHV-8"分子开关基因"-Rta启动子转录活性的虫荧光素酶值上升37倍；HSV-1感染释放的IL-10、4部分贡献于HHV-8复制。本项目的目的是寻找HSV-1作用于Rta启动子中特异性应答位点序列；鉴定参与该位点蛋白-DNA结合的转录因子；在IL-10、4活化的信号通路中寻找调控HSV-1激活HHV-8复制的关键信号通路。本项目的开展有助于阐明KS发病的分子机制。

在青年科学基金项目的资助下，我们运用分子克隆技术、虫荧光素酶报告基因分析、凝胶迁移分析（EMSA）和染色质免疫沉淀法（ChIP）等实验寻找到了单纯疱疹病毒1型（HSV-1）作用于人类疱疹病毒8型（HHV-8）分子开关蛋白RTA启动子区中的特异性应答位点序列及所参与的转录因子，HSV-1所对应的、能够主导RTA启动子活性的最小顺式调控区位于-133 bp和-95 bp之间，CREB和SP1是参与上述位点蛋白-DNA结合的转录因子。通过使用信号通路抑制剂、转染蛋白激酶的显性负相（DN）质粒和蛋白表达质粒等方法以及运用免疫印记（Western blot）、免疫荧光分析（IFA）和定量PCR（RT-qPCR）等实验，鉴定了调控HSV-1激活HHV-8裂解性复制的关键信号通路，其中PTEN/PI3K/AKT/GSK-3β通路发挥了重要作用，ERK MAPK信号通路也部分调节了HSV-1诱导的HHV-8复制（BMC Microbiol, 2011, 11:240）。另外，在完成青年基金规定的研究内容基础上，课题组还进行了有益的探索，发现了新的增长点，即进行“调控HSV-1激活HHV-8裂解性复制的miRNAs鉴定”研究。通过运用miRNA芯片、生物信息学软件预测、虫荧光素酶报告基因分析、功能获得和功能缺失等实验和技术，发现HSV-1通过下调细胞miR-498和miR-320d导致其靶基因Rta表达上调，从而激活HHV-8裂解性复制，促进病毒颗粒释放（PloS ONE，接受序号为PONE-D-12-31366R1 10.1371/journal. pone. 0055832）。以上研究均围绕一个主题即“HSV-1激活HHV-8裂解性周期复制的分子机制”来进行，研究结果有助于进一步阐明KS发病的分子机制。.在此基金的资助下，申请人以第一、共同第一和共同通讯作者身份发表SCI文章5篇，以通讯作者身份发表中文核心期刊文章5篇。另外，此基金也资助了有本人参与的另1篇SCI文章及另1篇中文核心期刊文章。