识别肌球蛋白V的自身抗体发现及其在抗磷脂综合征中致病机理的研究

Antiphospholipid syndrome (APS) is very harmful and may cause reduplicative thrombosis and abortion, and the pathogenesis of APS is complicated. Many patients can not be diagnosed early through the detection of the current routine antibodies, thus causing unfavorable outcomes. Through high-throughput protein chip screening, bioinformatic analysis and ELISA validation of the serum of patients, Our previous studies found that the anti-Myosin V antibody expression was significantly higher in patients with APS especially in primary APS patients. On the basis of previous studies, this project intends to study the effects of anti-Myosin V antibody through purifing the antibodies in serum of patients and preparing monoclonal antibodies. We do researches on how the antibodies activate the thrombosis-related cells in vitro. Besides, in vivo we will use the antibodies to build abortion and thrombosis animal models to further prove its important pathogenic role in thrombosis. We will lay a solid foundation for the study- Myosin V as a new target antigen of anti-phospholipid antibody.

抗磷脂综合征（APS）是以反复血栓形成、病态妊娠以及抗磷脂抗体持续阳性为特征的一种自身免疫性疾病。它可导致重要的脏器功能障碍，严重影响患者的生活质量及生存率。很多病人无法检测到目前已知的抗体，从而延误诊断造成不良结局。我们前期通过蛋白质芯片技术对我们APS-上海（APS-SH）数据库中病人的血清进行芯片筛选、生物信息学分析及ELISA验证后首次发现抗肌球蛋白V抗体的表达在APS病人中显著增加，尤其在原发性APS病人中的表达显著增高，并且和静脉血栓及流产事件存在显著相关。在前期研究基础上本项目首先拟扩大样本量进一步验证该抗体的表达水平，同时利用病人血清中纯化的抗肌球蛋白V抗体及制备的单克隆抗体，重点研究其造成凝血及血栓前状态的可能机制；体内使用该抗体构建流产及血栓的动物模型，进一步研究其在血栓形成中的重要致病作用。以此深入研究肌球蛋白V作为抗磷脂抗体新的靶抗原的机制及其潜在临床应用价值。

抗磷脂综合征（APS）是以反复血栓形成、病态妊娠以及抗磷脂抗体持续阳性为特征的一种自身免疫性疾病。它可导致重要的脏器功能障碍，严重影响患者的生活质量及生存率。很多病人无法检测到目前已知的抗体，从而延误诊断造成不良结局，所以我们的工作主要目的是筛选出重要的新的致病性抗体可以增加临床诊断的敏感性。我们前期通过蛋白质芯片技术对我们APS-上海（APS-SH）数据库中病人的血清进行大芯片筛选、生物信息学分析及ELISA验证后首次发现抗肌球蛋白V抗体的表达在APS病人中显著增加，尤其在原发性APS病人中的表达显著增高，并且和静脉血栓及流产事件存在显著相关。大样本验证对APS （n=139）、SLE（n=100）、SS（n=25）及健康对照（n=74）进行137种蛋白的小芯片订制，结果显示IgA/G/M抗MYO5A抗体在APS中水平显著高于疾病对照组及健康对照组，同时高于无症状aPL-Carrier组.逻辑回归分析得出IgG/IgM型抗MYO5A抗体均为APS患者血栓形成（包括动脉血栓及静脉血栓 ）的高风险因素。我们选取了5例APS患者血浆，通过亲和层析方法体外纯化抗myosin 5A抗体，进一步通过体外实验及小鼠血栓模型探索抗体的致病作用。使用抗体刺激内皮细胞进行转录组测序分析发现参与细胞黏附的分子显著上调，此外，内皮细胞中MAPK通路显著活化。体外研究证实抗体刺激可以促进内皮细胞ICAM-1、及VCAM-1的基因表达，促进ICAM-1及VCAM-1的分泌，促进内皮细胞与中性粒细胞的黏附。此外，加用抗Myosin 5A抗体刺激后，我们发现p38/MAPK/NF-kB通路显著活化，而P38通路抑制剂可阻断内皮活化和中性粒细胞黏附功能。我们将体外纯化的抗myosin 5A抗体注射到小鼠体内诱导血栓模型。我们在活体可视显微镜下发现提睾肌动脉血栓形成的增加，FeCl3损伤诱导颈动脉血栓模型也验证了抗Myosin 5A抗体显著促进了颈动脉血栓形成。我们的研究为APS 新的诊断抗体的开展提供坚实的实验基础，并且进一步揭示疾病的规律及发病机制以为治疗提供新的可能靶点。