基于外泌体中循环mi-RNA研究回回甘松饮干预3T3-L1与293T代谢性跨越沟通的分子机制

Diabetic Kidney Disease(DKD) seriously endangers human health.A new study has found that:fat cells’ exosome play an important role in renal fibrosis(RF),and the cycle of mi-RNA is more easily found in human plasma,are not easy to decompose,express the characteristics of stable.,and hui-hui gan-song yin(HGY) by exosomes’ circulation of mi-RNA,intervention fat metabolic crosstalk(MCT) between cells and renal inherent cells,and then in the early stage of DKD restore glomerular steady state.Previous studies have found that:based on the Hui-medicine’s "FOUR-XING theory",HGY can effectively improve clinical symptoms in patients with DKD and ZDF rats’ glucolipid metabolism level,and given priority to with miR-21 targets PTEN/Akt signal pathway,improve early DKD RF.to elucidate the molecular mechanism of early DKD HGY intervention,this topic on the Hui-medicine’s theory, exosomes’ mi-RNA and MCT as the breakthrough point,with ZDF rats,3T3-L1 and 293T cell as the research object,using the technology such as molecular biology、laser confocal,from molecular level to reveal the molecular mechanisms HGY regulate ‘exosomes’ MCT of “cyclic mi-RNA-3T3-L1-293T”.

糖尿病肾病(DKD)严重危害人类健康。最新研究发现：脂肪细胞分泌的外泌体在肾脏纤维化(RF)方面发挥重要作用,且其中的循环mi-RNA较容易在人血浆中发现，有不易分解、表达稳定的特性。我们推测:回回甘松饮(HGY)通过外泌体中的循环mi-RNA，干预脂肪细胞与肾脏固有细胞间的代谢性跨越沟通(MCT)，进而在早期DKD阶段恢复肾小球稳态。前期研究发现:基于回医“四性学说”组方的HGY能有效改善DKD患者临床症状及ZDF大鼠的糖脂代谢水平,并以miR-21为主靶点调控PTEN/Akt信号通路，改善早期DKD的RF。为阐明HGY干预早期DKD的分子机制,本课题从回医理论出发,以外泌体中循环mi-RNA及MCT为切入点,以ZDF大鼠、3T3-L1及293T为研究对象,运用分子生物学、激光共聚焦等技术,从分子水平揭示HGY调控“外泌体中循环mi-RNA-3T3-L1-293T”进行MCT的分子机制。

糖尿病肾病（DKD）严重危害人类健康。最新研究发现：脂肪细胞分泌的外泌体在肾脏纤维化(RF)方面发挥重要作用，且其中的循环mi-RNA较容易在人血浆中发现，有不易分解、表达稳定的特性。本项目完成了血清差异外泌体miRNAs筛选、3T3-L1前脂肪细胞的诱导和IR模型建立、甘松饮（GSY）对IR的3T3-L1脂肪细胞的干预、GSY对IR的3T3-L1脂肪细胞来源外泌体miRNA-21-5p的干预、GSY对TCMK-1细胞的干预、脂肪细胞的诱导和共培养体系的建立、鉴定共培养体系中的外泌体来源于脂肪细胞、GSY对共培养体系中TCMK-1细胞的干预分子机制、GSY对来源于脂肪细胞的miRNA-21-5p的影响与脂质变化的相关性研究等实验内容，发现：GSY可以改善胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的糖脂代谢过程（P<0.01），上调胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞中PPARγ、GLUT4、FABP4蛋白和基因的表达量（P<0.01），上调脂肪细胞来源外泌体中miRNA-21-5p的表达（P<0.01），下调高血糖环境中TGF-β1和p-SMAD3蛋白的表达水平（P<0.01），上调p-SMAD1、p-SMAD2和p-SMAD7蛋白水平的表达（P<0.01），调控来源于脂肪细胞的Exo分泌的miRNA-21-5p（P<0.01），抑制IR环境下TCMK-1细胞增殖，减少TCMK-1细胞的凋亡。验证了“GSY通过循环外泌体中的miRNA-21-5p干预脂肪组织与肾脏固有细胞间的代谢性跨越沟通，改善DKD环境下肾小球功能，进而在早期DKD阶段恢复肾小球稳态”的假说。