基于PD-1/PD-L1信号通路和Th17/Treg细胞失衡研究补肾清毒法治疗CHB的作用机制

慢性乙型肝炎（CHB）的免疫逃避是临床治疗的难点，树突状细胞(DC)抗原递呈功能低下、PD-1/PD-L1信号通路抑制以及Th17/Treg细胞失衡构成了免疫耐受的主要环节。中医药治疗CHB不容易产生耐药性，且起效后作用较稳定和长久，"反跳"现象少，本课题以中医"肾虚疫毒内伏肝血"的伏气理论与现代免疫分子机制结合，在前期研究阐明了补肾清毒法影响DC功能的基础上，借助CHB患者、转基因小鼠以及体外实验，利用Elispot 、Pentamer-FACS、定量PCR等技术，对DC抗原递呈能力，PD-1/PD-L1信号通路抑制和Th17/Treg细胞亚群数量及功能变化三个免疫抑制的主要方面进行研究，探讨补肾清毒法抗HBV可能的作用靶点和机理，进一步阐明HBV持续感染的免疫逃逸与中医伏气理论"肾虚邪伏肝血"病机的关系,试图揭示CHB伏气病机的本质，为中医治疗CHB提供理论和实验依据。

慢性乙型肝炎（CHB）的免疫逃避是临床治疗的难点，本课题通过系统地研究HBV感染影响免疫耐受的三个主要环节：DC成熟度及功能、PD-1/PD-L1信号通路和Th17/Treg免疫平衡，探讨不同层面HBV免疫耐受的作用途径和补肾清毒法抗HBV可能的作用靶点和机制，阐明补肾清毒法治疗CHB的免疫活化机制。.实验结果表明：1、补肾清毒方可上调CHB患者成熟DC细胞表达共刺激分子CD80、CD86，能改善CHB患者DC成熟度，提高DC表面表型的表达；2、补肾清毒法能使CHB患者PD-1升高，PD-L1降低，PD-L2升高，表明补肾清毒法不是通过降低PD-1，而是调节PD-L1/PD-L2平衡而影响PD-1/PD-L1信号通路的；3、补肾清毒汤对HBV小鼠血清HBV-DNA无明显影响；但能改善HBV转基因小鼠肝组织炎症、能降低血清IL-17浓度、提高IFN-r浓度，并有提高CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞的比例的趋势；4、补肾清毒法联合核苷酸药物能较快降低中医临床证候评分，联合核苷酸药物能持续且稳定地降低HBV-DNA、转氨酶（ALT）,效果优于核苷酸类似物的单独使用。CHB患者外周血Treg、IL-17、IL-10、TGF-β表达增加,补肾清毒法能显著降低Treg细胞表达频率。5、补肾清毒法治疗后CHB患者外周血特异性CTL细胞数量明显的上升, Perforin、GranzymeB、IFN-γ表达呈上升趋势，尤其是细胞因子IFN-γ，表明补肾清毒法可能通过增加特异性CTL细胞数量和改善活化CTL分泌细胞因子的能力。.本研究揭示了HBV持续感染的免疫逃避与中医伏气理论“肾虚邪伏”病机密切相关，揭示慢性乙肝伏气病机的本质，阐明了补肾清毒法治疗CHB的免疫耐受分子机制和作用靶点，是通过提高DC成熟度、DC抗原提呈能力、调节PD-1/PD-L1信号通路和Th17/Treg免疫平衡发挥治疗作用。补肾清毒法治疗乙肝作用不是直接杀灭病毒，而通过改善机体的免疫功能、影响机体免疫耐受状态而发挥长期治疗效用。研究为补肾清毒法治疗慢性乙型肝炎提供科学的依据和新的思路，对临床具有指导意义。