基于"有故无殒"理论雌激素受体介导的雷公藤毒效相关性研究

雷公藤内酯醇是雷公藤主要的抗肿瘤活性成分，并选择性抑制雌激素依赖性肿瘤，肝毒性限制了它在临床应用，其毒性及药效可能与雌激素受体(ER)信号通路产生的生物效应的多样性有关。本课题以研究雷公藤内酯醇的肝毒性与抗乳腺癌之间的相关性及其ER介导的机制为目的，基于中医"有故无殒"理论与中药"有病则病当之"毒性理论，采用HPLC/APCI/MS与微透析-MS分析技术探讨雷公藤内酯醇在病/生理模型上药物组织分布及与ERα/β分布的关联性，建立原代培养的人乳腺癌ER（+/-）细胞研究雷公藤内酯醇对乳腺癌的选择性抑制作用，采用放射配体结合试验、激光共聚焦扫描技术、Western blot法、实时荧光定量PCR法与免疫组化等方法与技术，在整体、细胞和分子水平分别探讨雷公藤内酯醇选择性调节ER介导肝毒性与抗乳腺癌药效作用及其机制，为阐明有毒中药"辨病减毒"理论奠定实验基础，为雷公藤用于临床肿瘤治疗提供科学依据。

实验基本按任务书计划执行，实验结果基本符合预期目标，相关研究成果及时写成论文并发表在权威的期刊杂志上，其中国内核心期刊3篇，SCI收录1篇，待发表2篇（有录用通知证明）；另有会议论文4篇，1篇获优秀论文奖。培养硕士1名，参与培养博士后1名及博士1名。. 雷公藤内酯醇（Triptolide，TP）抗乳腺癌的作用实验研究表明：①TP对乳腺癌ER（+）的细胞MCF-7与ER（-）的MDA-MB-231细胞抑制作用具有显著差异，24h时IC50 相差8 倍左右，48h时相差三倍左右，72h时相差两倍左右，提示TP抗肿瘤作用可能与雌激素受体有关；实验进一步证明，雌激素确实能减弱雷公藤甲素对乳腺癌细胞MCF-7的增值抑制作用，且随时间增长作用减弱。②分子机制研究表明，TP能抑制雌二醇引起的ERK1/2激活作用，说明TP抑制肿瘤细胞增殖的效应与抑制ERK1/2蛋白磷酸化有关，而且该抑制作用起效非常迅速，给药后1hr即可明显抑制ERK1/2蛋白磷酸化，并随着时间的延长抑制作用增强。③通过建立人乳腺癌裸鼠移植瘤试验发现，TP能明显抑制乳腺癌的增长，作用与阳性药多西他赛相当；且发现TP能明显同时抑制ERα的表达。. 雷公藤内酯醇肝毒性研究实验表明：①TP对转染了ERα的LO2细胞和对照组的抑制作用具有显著差异，24h时IC50 相差近2 倍左右；与pEGFP-C1-LO2细胞比较, 雌激素不能增加高表达ERα的LO2细胞增殖指数，与使pEGFP-C1-LO2细胞S期细胞的比例显著增加的情况减弱。但TP与雌激素合用组却使S期增加。表明TP与雌激素合用后与单用TP组比较对细胞周期的抑制作用明显减轻。而MCF7与LO2共培养可以减弱雷公藤内酯醇对LO2的毒副作用，由此可以推测雌激素受体可能对TP肝细胞毒性作用减弱有所影响。②建立稳定转染pEGFP-C1-ER α质粒的LO2细胞，ERα高表达后，可逆转雌二醇引起的LO2细胞中ERK1/2激活作用；而ERα高表达后TP导致ERK1/2蛋白的磷酸化。. 上述实验结果为阐释中医“有故无殒”理论及有毒中药“辨病减毒”学说奠定实验研究基础，并阐明ER介导的雷公藤内酯醇抗乳腺癌作用机制，为雷公藤在肿瘤临床的应用提供科学依据，从而很好地完成了本课题的研究目标。