肠道病毒71型衣壳蛋白与受体蛋白SCARB2和PSGL-1作用位点的确定及其阻断剂的筛选

肠道病毒71型（EV71）是手足口病的主要病原体，近年来在我国各地都有感染病例，在某些地区婴幼儿中大爆发，引起极大恐慌。EV71的两种细胞受体SCARB2和PSGL-1已于2009年被发现。病毒蛋白与细胞受体间的相互作用是启动病毒感染的第一步，关系到病毒感染细胞的入侵机制及病毒入侵的药物靶点。本项目拟通过酵母双杂交或免疫共沉淀技术从EV71四种衣壳蛋白中筛选出能与上述两种受体蛋白互作的衣壳蛋白，并通过构建衣壳蛋白缺失突变，进一步明确衣壳蛋白与受体蛋白的关键作用位点，然后通过流式细胞、激光共聚焦等技术证实衣壳蛋白在细胞膜上与受体蛋白的相互结合。最后以病毒衣壳蛋白上与两种受体蛋白发生相互作用的肽段或该衣壳蛋白本身为诱饵，通过15肽库和 RNA适配子随机文库，筛选与目标肽段相互作用的短肽或RNA适配子，以此阻断病毒蛋白-受体间的相互作用，达到抑制病毒感染的目的，并可能开发为病毒诊断试剂。

本课题在2009年2个EV71受体被发现的基础上提出，打算研究EV71衣壳蛋白与EV71两受体间的相互作用位点。项目执行3年来，我们采用酵母双杂交、免疫共沉淀技术进行研究，已经发现了衣壳蛋白VP1的第304-582碱基所对应的氨基酸能够与PSGL-1结合。受本基金资助，我们完成了2株手足口病毒临床株的全序列测定，经序列对比鉴定为EV71-C4和CoxA16病毒株；我们用杆状病毒MultiBac系统，构建了EV71 VLP，并用VLP开发了EV71单克隆中和抗体；我们原核表达了EV71的8个蛋白VP1-4和2A,2C,3C,3D并成功制备了VP1的多克隆抗体，其他蛋白抗体在进一步制备中，为进一步研究这些蛋白的功能奠定基础；我们正在通过质谱分析研究EV71蛋白与宿主细胞的相互作用，以了解病毒的感染机制。受本基金资助，已发表一篇学术论文，并有1名博士和3名硕士顺利毕业。