基于微透析/荧光内窥技术与PK/PD相结合的中药穴位给药内病外治“贮库应答效应”机制研究

The Acupoint Plaste doses is far less than the oral doses,and it is hard to find pharmacokinetic rule in whole blood.Therefore, we propose that Chinese medicine effective component is absorbed by acupoint, forming local body drug library storage effect, and achieve high local concentration of the drug. The drug storage response has meridians amplification effect, so as to improves pharmacological action.Sinomenine power was used as a model drug,microdialysis technology was used to gather up sample in Acupuncture points, articular cavity and blood.Enzyme immunoassay was used to determined the content of IL - 1, IL - 4 in articular cavity.PK/PD model was established, between it and oral were contrasted. the key influencing factors were found out. Using fluorescent endoscopic confocal laser technology, the absorption, distribution and elimination of process were studied.We aim to not only investigate the penetration characteristics,effect in points and PK/PD, but also to explain the Acupoint Plaste doses function mechanism in order to reveal the relationship between the part and the whole in absorption.We will study the compound Chinese medicine in the future.

内病外治穴位贴敷药物以远小于口服剂量作用于穴位，在全血中很难找到药动学规律。据此，课题组认为中药有效成分是通过穴位吸收，形成局部药物贮库效应，达到局部较高的药物浓度，通过药物贮库应答产生经穴放大效应，从而发挥相对较强药理作用。拟选取"中药青藤碱外敷散"作为模型药物穴位给药，采用微透析技术对类风湿性关节炎模型动物进行穴位、关节腔和与血液定时地同步取样，测定有效成分青藤碱和关节腔内精氨酸、瓜氨酸、IL-1、IL-4等含量变化，建立PK/PD模型；并与口服该药PK/PD关系比对，寻找出穴位给药奏效的关键影响因素及作用机制；并采用荧光内窥式激光共聚焦技术，观察记录荧光标记后的药物在穴位组织的吸收、分布和消除过程，旨在通过经皮渗透特性、穴位效应及PK/PD相关性研究，阐释中药外敷散穴位给药内病外治作用机理，揭示穴位吸收与整体效应关系，为中药复方穴位贴服药物内病外治机理研究奠定基础。

长期以来，穴位与非穴位经皮给药差异性缺乏科学性的阐述，导致中药穴位贴敷疗法的作用机理尚不明确。本课题创新性的提出“贮库应答效应”理论，认为中药有效成分是通过穴位吸收，形成局部药物贮库效应，达到局部较高的药物浓度，通过药物贮库应答产生经穴放大效应，从而发挥相对较强药理作用。开展了三个方面的研究：（1）采用FIVE(1)技术，观察经荧光标记后的青藤外敷散在膝关节腔的吸收、分布和转运过程，开展基于FIVE(1)图像的半定量法生物药剂学研究（2）采用微透析技术对类风湿性关节炎模型家兔进行关节腔局部14h连续取样开展药动学研究建立PK模型，确定药物动力学过程的驱动因素PK input（3）以关节腔中精氨酸和瓜氨酸为药效学指标，测定二者在透析液中的浓度为PD endpoint；以模型家兔血液中IL-1、RF-IgM、MMP-3的抑制率和OPG/RANKL的比值为PD endpoint，根据确定的PK input，建立PK-PD结合模型，得到模型动力参数。结果显示在基于FIVE(1)的生物药剂学研究中，可得到四种给药途径膝关节腔连续14h荧光图像，并根据药动学参数获取关键时间点的荧光累积强度IOD值，进行拟合回归，得到四组方程，绘制出了穴位给药后药物透皮吸收、 贮存与转运路径图，比较出了穴位给药与非穴位给药的差异性。在药动学研究中，得出四种给药途径均符合血管外给药的一级药物动力学模型，并得足三里给药途径、阳陵泉给药途径、非穴位经皮给药途径、口服给药途径的药动学参数。在PK-PD模型研究中，四种给药途径分别与六种药效学指标拟合均符合最大效应Emax模型，通过PK-PD参数、图像和Ce-t方程证明了说明典型穴位给药起效更慢、药物持续释放时间较长，药效更佳平缓，但总体治疗水平完全可达到甚至超过口服给药，说明药物治疗作用是协同经络穴位对人体的调节功能，相互激发和迭加而产生。本研究通过经皮渗透特性、穴位效应及PK/PD相关性研究，阐释中药外敷散穴位给药内病外治作用机理，揭示穴位吸收与整体效应关系，也为其他中药贴敷剂作用机理研究提供借鉴。