川芎嗪抗庆大霉素耳毒性作用及其分子机制的研究

庆大霉素耳中毒目前尚无有效防治方法。我们的前期研究发现川芎嗪可有效拮抗庆大霉素耳毒性。本项目将从整体、细胞及分子水平，从抗氧化及凋亡、抗钙离子角度深入探讨其作用机制。拟采用听性脑干反应、耳蜗铺片、透射电镜及TUNEL标记技术,动态观察用药前后听反应阈及形态学改变；检测耳蜗SOD的 mRNA和蛋白水平表达，以及 SOD活性、丙二醛及一氧化氮含量，动态观察川芎嗪对耳中毒组织氧自由基生成的影响。检测耳蜗钙蛋白酶、bcl-2、bax、 c-Jun氨基末端激酶mRNA的表达，及钙蛋白酶、Cyt-C、c-Jun氨基末端激酶、caspase3/8/9等蛋白水平的表达，测线粒体跨膜电位、caspase3/8/9活性变化和细胞内钙离子浓度变化，观察川芎嗪对庆大霉素诱导的毛细胞凋亡相关因子表达的影响。研究结果将有助于明确川芎嗪抗庆大霉素耳毒性作用及机制，以期为中药防治药物性聋及新药开发提供依据。

庆大霉素(gentamicin，GM)耳、肾毒性目前尚无有效防治方法。我们的前期研究发现川芎嗪(tetraethylplyrazine ,TMP)可有效干预GM耳肾毒性，本项目采用GM诱导的耳肾毒性动物模型，从抗氧化及凋亡角度深入探讨其作用机制。主要研究内容：TMP对GM耳毒性的保护作用；TMP对GM耳中毒豚鼠耳蜗组织总T-SOD、CuZn-SOD、Mn-SOD、MDA的影响；TMP对GM耳中毒豚鼠耳蜗JNK、p-JNK、p38MAPK的影响；TMP对GM耳中毒大鼠耳蜗AIF的影响。TMP对GM耳肾毒性的保护作用；TMP对GM豚鼠耳肾毒性组织JNK的影响。结果表明：氧自由基、JNK、p38MAPK、AIF介导了GM的耳毒性损伤，TMP可通过提高CuZn-SOD、Mn-SOD活力，抑制GM所致MDA的增高、以及p38MAPK、JNK和AIF等高表达，从而有效防护GM的耳毒性，这可能是TMP发挥防护作用的机制；JNK参与了GM 的耳肾毒性损伤，TMP可通过抑制GM所致JNK的高表达，从而有效防护GM的耳肾毒性, 这可能是TMP对耳肾损伤的联合保护作用机制。