基于“香气大出，即取服，勿过煮”探讨银翘散抗病毒作用的最佳煎煮时间及其干预TLR4/MyD88信号通路的研究

Yinqiao Powder was created by Wu Tang who was a famous medical scientist in Qing Dynasty.He made an expatiation about decoction time of Yinqiao Powder.The note is that if the aroma smell out,you can take the medication,do not decoct too much.The method is the key to achieve clinical curative effect.But,how long should we decoct the medicine? we don't know.Taking the professor's experience in 20 years as a guide,basing on the experimental data of published six articls,using a series of experimental techniques,we will systematic study the best decocted time about Yinqiao Powder and effect mechanism of the TLR4/MyD88 signal pathway.In conclusion,in order to more accurate and reasonable application the medicine,our topic can provide objective and scientific basis.It can develop ideas for TCM standardized.

银翘散是我国清代著名温病学家吴瑭创制的方剂，其方后载"香气大出，即取服，勿过煮"。该煎服法是保证银翘散取得疗效的关键前提。但"香气大出"具体是多长时间至今没有形成量化标准，亦尚无系统实验研究证实。以本团队导师20余年临床亲试经验为指导，前期实验数据已发表6篇论文为基础，本课题通过实时定量PCR、Western blot等实验技术，探讨银翘散抗病毒作用的最佳煎煮时间及其对TLR4/MyD88信号通路的干预机制。为更加准确合理地应用该方提供客观而科学的依据，为中医标准化的研究开拓新思路。

本课题采用鸡胚血凝体外实验、实时定量PCR、Western blot等实验技术及建立FM1感染BALB/c小鼠肺炎动物模型，探讨银翘散抗病毒作用的最佳煎煮时间及其对TLR4/MyD88信号通路的干预机制。研究首次揭示：（1）银翘散在不同煎煮时间、不同浓度下对流感病毒感染鸡胚均有一定的预防和保护作用，以3分钟高、中浓度组和6分钟高浓度组的作用最强。（2）不同煎煮时间银翘散含药血清对FM1刺激小鼠巨噬细胞Ana-1株，均能阻断TLR3和TLR4 mRNA水平和蛋白水平的高表达，并能阻断其下游MyD88依赖和非依赖途径主要信号转导通路，尤以3分钟和6分钟组最显著。（3）不同煎煮时间的银翘散均能降低FM1感染小鼠肺指数，具有保护作用，但对小鼠脾指数的影响较小。（4）银翘散不同煎煮时间各浓度组均能降低FM1感染小鼠肺组织病毒载量，且银翘散3分钟各浓度组、6分钟高浓度组与达菲药物效果相当。（5）小鼠肺炎模型实验，仍提示不同煎煮时间银翘散影响TLRs、MyD88依赖和非依赖通路关键因子，尤以3分钟和6分钟组显著。由此得出，银翘散抗病毒作用的最佳煎煮时间是煮沸后3-6分钟。