大麦小孢子脱分化与DNA甲基化关系的研究

以大田生长的大麦为材料，采用低温和甘露醇预处理对大麦小孢子进行预处理，获得大量脱分化小孢子，研究了小孢子脱分化与DNA甲基化关系。第一，在国内外首次建立了一套提取大麦小孢子DNA的方法—高速旋切离心法分离小孢子，超声波法使小孢子破壁 ，CTAB法和微量提取法提取DNA。第二，发现低温和甘露醇预处理能引起大麦小孢子核DNA甲基化发生明显变化。在国内外首次在分子水平上证明预处理是引起小孢子DNA去甲基化。第三，去甲基化试剂预处理可以明显提高小孢子脱分化频率。间接证明DNA去甲基化与小孢子脱分化的关系。故本研究已充分证明小孢子脱分化必须进行DNA去甲基化，此发现对大麦小孢子脱分化分子机理的提出奠定了重要基础。