长链非编码RNA AK000151在结直肠癌发生发展中的功能研究

Recent studies have demonstrated the importance of long non coding RNAs (lncRNAs) in both carcinogenesis and tumor suppression. LncRNAs is becoming an emerging paradigm of cancer research. However, in the "adenoma-adenocarcinoma" sequence, its role is still undefined. Our research is based on the previous result from gene microarray expression chips and analysis of Gene Annotation Database. RT-PCR was performed to validate the targeted lncRNAs. In this project we chose our interested lncRNA AK000151 as the study object. We will delineate the function role of lncRNA AK000151 in the development and progression of colorectal cancer and its preliminary biomolecular mechanism.

长链非编码RNA （long noncoding RNAs，lncRNAs) 因其在致癌与肿瘤抑制途径中显露出的潜在作用而成为肿瘤研究的新热点。但是在腺瘤-腺癌途径中, lncRNAs的作用仍待进一步研究。本研究基于前期基因表达微阵列芯片技术和基因功能注解数据库，筛选出与结直肠癌发生发展相关的目标lncRNAs；经过筛选、文献查阅和RT-PCR验证，对感兴趣的lncRNA AK000151在肠癌细胞发生发展进行进一步的功能研究，初步探究lncRNA影响结直肠癌发生发展可能涉及的分子机制。

第一部分 LncRNA AK000151对人肠癌细胞体外生长迁移、侵袭能力.的影响.方法：在不同肠癌细胞系用定量PCR法检测lncRNA AK000151的相对表达量。构建lncRNA AK000151干扰与过表达质粒，显著下调或上调lncRNA AK000151表达水平后，观察该lncRNA对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭等生物学功能的影响。.结果：lncRNA AK000151在CL187细胞中相对高表达，而在SW620细胞中相对低表达。用AK000151干扰与过表达慢病毒颗粒分别转染CL187细胞与SW620细胞，稳定上调SW620，下调CL187细胞中AK000151的表达水平。MTT实验及克隆形成实验发现AK000151能显著促进肠癌细胞的增殖， transwell实验发现AK000151能显著促进结直肠癌细胞的迁移及侵袭能力。.结论：lncRNA AK000151能显著促进肠癌细胞的增殖，迁移和侵袭能力。..第二部分 LncRNA AK000151对荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响.方法：利用稳转的过表达细胞株SW620和干扰细胞株CL187, 构建皮下移植瘤模型。.结果：在干扰组裸鼠中，干扰后的肠癌细胞皮下成瘤的速度及大小显著低于对照组，进而影响裸鼠体重，也出现显著差异。在过表达组裸鼠中，lncRNA过表达组的皮下肿瘤体积明显大于对照组，但过表达组裸鼠的体重与对照组相比无显著差异。.结论：lncRNA AK000151在人肠癌细胞系SW620中过表达后，能显著促进裸鼠皮下瘤的生长；其在人肠癌细胞系CL187被干扰后，能抑制裸鼠皮下瘤的生长。..第三部分 LncRNA AK000151促进肿瘤发展的初步机制研究.方法：通过基因序列比对，发现lncRNA AK000151为PBRM1内含子上的一个反向互补序列。利用RT-PCR法检测前两部分细胞中、裸鼠实验中肿瘤及临床标本中lncRNA AK000151和PBRM1的表达量。.结果：比对照组裸鼠，干扰后裸鼠肿瘤内lncRNA AK000151的表达量下降，PBRM1的表达量上升，两者的变化均有显著统计学差异（P<0.001）。在过表达组实验裸鼠肿瘤中，过表达前后裸鼠肿瘤内lncRNA AK000151的表达量上升，PBRM1的表达量下降，两者的变化均有显著统计学差异 （P<0.001）。两者的相关系数为r =-0.