RET调控VEGFR2在多发性内分泌腺瘤病2型（MEN2）的作用及机制研究

Heterogeneity in phenotype and limitation in current treatments of Multiple Endocrine Neoplasia type 2 urge for more specific and well-targeted strategies. We applied array base techniques in previous research and unveiled RET and VEGFR2 were coincidently highly expressed and phosphorylated in MEN2 derived cell lines. Further, we confirmed these findings in MTC tissue that 90% of which with VEGFR2 expression, besides, RET-VEGFR2 only highly expressed in TT and MZ-CRC-1 out of 319 cell lines. Knockdown of RET reduced VEGFR2 expression. VEGFA, the ligand of VEGFR2, induced TT cell proliferation by 25%, which was compromised by RET knockdown. We plan to investigate the molecular mechanism in RET and VEGFR2 regulation ，first confirm expression and phosphorylation statues in MEN2 components, then construct VEGFR2 reporter system to investigate the relationship and regulation mechanism in RET-VEGFR2, after that determine how the RET-VEGFR2 regulate proliferation, migration, differentiation, survive in MEN2 components and shed light on developing effective and targeted therapy.

多发性内分泌腺瘤病2型以RET为致病基因，但其治疗方法具有局限性，亟需寻找更加高效的治疗手段，本研究前期采用高通量芯片技术对MEN2相关肿瘤细胞系进行酪氨酸激酶受体表达及活性分析发现RET及VEGFR2呈共同高表达，并在MEN2相关肿瘤组分中证实90%的组织中存在VEGFR2表达，且在319种细胞系中仅MEN2相关细胞系中存在共同高表达。进一步通过siRNA干扰沉默RET可下调VEGFR2表达，并负性影响其配体VEGFA增加TT细胞增殖的能力。本研究拟在已有研究基础上进一步深入研究RET调控VEGFR2机制，在MEN2各肿瘤组分中确认RET-VEGFR2表达情况及活性，进一步通过构建VEGFR2报告基因研究RET调控VEGFR2的作用与分子机制，并通过体外、裸鼠模型及不同RET酶活性特异性VEGFR2敲除小鼠模型研究MEN2肿瘤组分中增殖、分化、生长中的作用，为靶向药物开发提供思路。

多发性内分泌腺瘤病2型以RET为致病基因，但其治疗方法具有局限性，亟需寻找更加高效的治疗手段，本研究前期采用高通量芯片技术对MEN2相关肿瘤细胞系进行酪氨酸激酶受体表达及活性分析发现RET及VEGFR2呈共同高表达，并在MEN2相关肿瘤组分中证实90%的组织中存在VEGFR2表达，且在319种细胞系中仅MEN2相关细胞系中存在共同高表达。目前研究已知RET基因是MEN2A的致病基因，但是由于MEN2A具有显著的临床表型异质性，一些研究表明RET之外的其他遗传变异可能也在其中发挥作用，然而关于这方面的研究尚未有确定结论，本研究首次通过外显子组测序技术在配对的MEN2A肿瘤组织中需找基因变异，并进一步利用Affymetrix SNP6.0芯片技术在基因组范围寻找除RET基因突变之外与MEN2发病相关的分子机制。发现13个基因在外显子测序和SNP芯片中存在变异，其中包括EIF4G1（p. E1147V），进一步将突变型和野生型EIF4G1质粒分别转染甲状腺髓样癌细胞株──TT、MZ-CRC1细胞，肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株——PC12细胞，结果显示突变型EIF4G1增加细胞增殖和RET/MAPK磷酸化水平，而沉默EIF4G1减低细胞增殖和RET/MAPK磷酸化水平。采用ERK抑制剂U0126处理TT细胞后证实蛋白水平证实磷酸化ERK水平下调，但是RET、 VEGFR2的表达水平无明显改变，提示U0126可能参与ERK转录水平的调节。跟其他非内分泌肿瘤组织相比，内分泌肿瘤突变数目低于非内分泌肿瘤。上述研究提示RET基因突变是MEN2的主要启动因素，然而一些低频突变例如EIF4G1可通过调控RET通路的活性而参与MEN2A肿瘤的发生和发展。下调VEGFR2表达及其转录后调节可能与RET相互作用共同参与MEN2A的肿瘤发生发展。