胰腺癌分泌蛋白质组相关的自身抗体及其特异抗原表位谱的研究

肿瘤可以分泌特殊蛋白并产生大量针对肿瘤相关抗原的自身抗体，它们有可能作为肿瘤诊断和预后判断的依据。目前，分泌蛋白质组和血清自身抗体研究中存在抗原特异性不高、蛋白表达纯化困难，以及蛋白质组的大量血清学验证等瓶颈问题。本研究拟建立胰腺癌无血清器官培养，获得胰腺癌分泌蛋白质组，用Spot Synthesis 技术原位合成质谱鉴定的蛋白肽段，并与胰腺癌患者血清共孵育筛选分泌蛋白质组相关的胰腺癌自身抗原。进而，对1-2种胰腺癌相关抗原，如TNC和ANXA2进行抗原表位作图（Epitope Mapping），用肿瘤特异抗原肽取代全长蛋白获得胰腺癌自身抗原特异表位谱（Specific Epitope Mapping），制备抗原表位芯片（Epitope Mini-array）用于大样本的血清学验证，同时检测多个候选标志，大大提高筛选效率。经文献检索，尚未发现相关报道。

建立胰腺癌体外无血清器官培养体系，获得分泌蛋白。采用Shotgun LC-MS/MS和SDS-PAGE-HDMS两种蛋白质组的技术策略，分析胰腺导管癌和正常胰腺组织的分泌蛋白质组。经过严格的筛选标准过滤，鉴定胰腺癌组织分泌蛋白和正常胰腺组织的分泌蛋白，构建了胰腺癌组织特异分泌的“胰腺癌特异分泌组”数据集。分离鉴定了含570个非冗余蛋白的胰腺癌分泌蛋白质组。经通路分析和大样本的ELISA血清学验证，获得候选标志蛋白。其中TNC和ANXA2与胰腺癌发生发展密切相关，在胰腺癌患者中的血清水平均明显高于健康对照。其诊断灵敏度和特异度分别是74.1%和65.5%以及63.8%和63.6%。与血清CA19-9联合使用，可使ROC曲线下面积达0.93。结果提示，TNC和ANXA2是新的有潜力的胰腺癌诊断标志物。同时，建立和验证了由4个差异蛋白质峰（m/z分别为7kDa、8kDa、5kDa和5344 Da）组成的胰腺癌血清小分子蛋白谱，其中5344Da差异峰后期分离鉴定为α-纤维蛋白原片段。该诊断模型与CA19-9联用可明显提高胰腺癌检测敏感性和III和IV期胰腺癌的诊断能力（P < 0.05）。发表SCI收录论文7篇；核心期刊文章8篇；申请国家发明专利2项（授权1项）。项目培养博士后2人、博士8人和硕士4人。