基于TCR/FcεRI/MAPK通路网络调控的治咳川贝枇杷滴丸清热止咳作用机制研究

In clinic, prescriptions with clearing heat and antitussive properties showed remarkable therapeutic effects against cough. However, how to explain their mechanisms remains unresolved. In this project, an often used prescription to cure cough induced by phlegmy heat, Chuanbeipipa dropping pills, was chosen as object of study. In our previous work, we have studied on its pharmacological effects, chemomics, its anti-inflammatory ingredients, and forecasted their targets and related signaling pathways. Based on our previous work, and combined with our results of genomics and proteomics, we will go on to study the synergistic effects of these ingredients against cough and its mechanisms in a "network pharmacology" mode, with emphasis on T cell receptor(TCR), FcεRI, and MAPK signaling pathways. Our aim is to analyze its mechanism network of multi-components, multi-targets, and multi-pathways, and to clarify the molecular mechanisms of its clearing heat and antitussive properties. At last, comparison of pharmacologic effects of ingredients mixtures with different ratios will test our analytical results. In this project, we established a modern mode to study traditional Chinese prescriptions, which will be of great significance to reveal the mechanisms of their clearing heat and antitussive properties of prescriptions.

临床表明清热止咳方剂对咳嗽有很好的疗效，如何诠释其科学内涵是中医药现代化亟待解决的关键问题之一。我们以临床常用于治疗痰热郁肺所致咳嗽的复方中药治咳川贝枇杷滴丸为研究对象，在前期药效学、整体化学物质组学、抗炎成分筛选及相关靶点和通路预测的基础上，本项目将以网络药理学的研究模式开展治咳川贝枇杷滴丸清热止咳药效物质群的抗炎镇咳的协同作用机制研究，结合基因组学和蛋白组学研究结果，重点围绕T细胞受体（TCR）、FcεRI、MAPK等重要通路进行，解析其多组分、多靶点、多途径的作用网络，系统地阐明其清热止咳作用的分子机理。通过对得到的有效物质群不同配比组合后的药效比较验证其清热止咳作用的机制。该项目建立了一种复方中药的现代研究模式，对于揭示复方中药的清热止咳作用机理具有重要意义。

本项目选取了临床常用于治疗痰热郁肺所致咳嗽的复方中药治咳川贝枇杷滴丸为研究对象，在前期药效学、整体化学物质组学、抗炎成分筛选及相关靶点和通路预测的基础上，以网络药理学的研究模式开展治咳川贝枇杷滴丸清热止咳药效物质群的抗炎镇咳的协同作用机制研究。首先验证了治咳川贝枇杷滴丸的体内抗炎活性，并通过采用改良的UPLC/Q-TOF-MS方法，鉴定出治咳川贝枇杷滴丸提取物中的33个化合物是具有抗炎活性的。以其中四种中药成分中的6种代表性组分（即枇杷叶中的熊果酸和齐墩果酸，平贝母中的贝母碱，桔梗中的桔梗皂苷元和远志酸，半夏中的鸟苷）为例，进行了通路和靶点预测。结合基因芯片的研究结果，解析其多组分、多靶点、多途径的作用网络，系统地分析了其清热止咳作用的分子机理主要是与T细胞受体（TCR）、FcεRI、MAPK等重要通路相关。最后通过对得到的有效物质群进行六因素三水平正交设计[L54（36）]得到了54组不同配比组合，在TNF-α诱导的细胞炎症模型中进行抗炎药效比较，得到了细胞水平上的最佳配比。之后，建立了浓氨水诱导的小鼠咳嗽模型，比较给药后小鼠咳嗽潜伏期和3分钟内咳嗽次数多少，结果显示治咳川贝枇杷滴丸延长小鼠咳嗽潜伏期并明显减少3分钟内咳嗽次数，六种代表性抗炎活性成分单体按照原方配比及按照正交设计筛选出的最佳配比均有一定的改善作用。该项目建立了一种复方中药的现代研究模式，对于揭示复方中药的清热止咳作用机理具有重要意义。