甘草干预下雷公藤二萜内酯代谢产物及代谢组学研究

雷公藤及有效成分雷公藤甲素和雷公藤内酯酮等二萜内酯（DIT）是国内外公认具有良好疗效的治疗类风湿关节炎中药，但毒副作用限制了临床应用。文献和前期研究表明甘草能显著降低雷公藤及DIT毒性，增强免疫抑制活性和治疗类风湿关节炎效果。前期研究发现甘草能显著降低DIT的Cmax，AUC，增加清除率，加速体内代谢和排泄，降低组织分布浓度。甘草既能加速DIT代谢和排泄，又能增强免疫抑制和抗炎活性并降低毒性，说明DIT很可能代谢生成高效低毒代谢物发挥疗效。本项目首次分离鉴定甘草干预下DIT的体内代谢物，发现高效低毒代谢成分，为开发治疗指数更好的新药奠定基础；首次进行甘草干预下DIT代谢组学研究，确定受甘草调节的表征DIT肝肾毒性的"减毒生物标记物"，为建立根据"减毒生物标记物"筛选有毒中药配伍减毒物质基础的新方法奠定基础；从代谢干预层面阐明甘草对DIT的减毒增效机制，为有毒中药配伍减毒机制研究提供新思路。

项目研究内容与目标一是发现甘草干预下雷公藤甲素和雷公藤内酯酮的高效低毒代谢物，为新药开发奠定基础；二是发现甘草干预下雷公藤甲素和内酯酮代谢组学差异，确定受甘草调节的“减毒生物标记物” ，阐明甘草对雷公藤类药物减毒增效机制；三是研究雷公藤二萜内酯ESI-MSn裂解规律，建立质谱定性鉴定方法。项目研究了甘草对雷公藤甲素和内酯酮在大鼠体液中的代谢物类型及量的影响。总结了雷公藤二萜内酯的质谱裂解规律，建立了质谱定性鉴定方法。鉴定了甘草干预下雷公藤甲素体内代谢物7个，为雷公藤乙素，5-羟基雷公藤甲素，2-羰基雷公藤甲素，2-羰基-5-羟基雷公藤甲素，甲基化雷公藤甲素，7,8,9,11,12,13—六羟基雷公藤甲素同分异构体两个。鉴定了雷公藤内酯酮体内代谢物6个，分别为一羰基化雷公藤内酯酮，一羟基化雷公藤内酯酮，二羟基化雷公藤内酯酮同分异构体三个，7,8,9,11,12,13—六羟基雷公藤内酯酮。雷公藤甲素和内酯酮单独给药和与甘草联合给药后代谢物基本相同，氧化代谢物为主要代谢物，联合给药组比单独给药组的各代谢物生成量要大，说明甘草可加速雷公藤甲素和内酯酮的体内代谢。首次鉴定了5个内源性代谢物，为1-甲基海因，4-氨基烟酸甲酯，3, 4-二氢-6-羟基-2-喹啉酮，2,6-二羟基喹啉和2-羟基喹啉。研究了甘草干预下雷公藤甲素和内酯酮代谢组学差异，确定雷公藤甲素毒性生物标记物8个，为泛酸，4,6-二羟基喹啉，3-甲基羟基吲哚，4,7-二羟基异黄酮，犬尿喹啉酸，L-苯丙氨酰基-L-羟脯氨酸，色氨酸和粪卟啉，甘草“减毒生物标记物”为泛酸，4,7-二羟基异黄酮，4,6-二羟基喹啉，L-苯丙氨酰基-L-羟脯氨酸，3-甲基羟基吲哚和粪卟啉。确定雷公藤内酯酮毒性生物标记物4个，为泛酸、犬尿喹啉酸、色氨酸和粪卟啉，甘草“减毒生物标记物”为色氨酸。雷公藤甲素和雷公藤内酯酮的毒性机制与其干扰了机体的能量代谢、色氨酸代谢、卟啉代谢等代谢途径有关。配伍甘草后，这些生物标记物所引导的能量、色氨酸和卟啉代谢等体内过程的回调是甘草的减毒机制之一。为解决代谢物雷公藤乙素的来源，建立了从雷公藤中制备雷公藤乙素的专利方法。申请了雷公藤甲素与内源代谢物1-甲基海因配伍的药物组合物专利。培养硕士研究生5名；发表论文7篇，其中核心期刊论文4篇；录用核心期刊论文1篇；投稿论文3篇，SCI和核心论文各1篇；申请发明专利2项。