新药筛选关键技术甲基化转移酶活性的免疫检测体系的研究

甲基转移酶催化的S-腺苷甲硫氨酸甲基化反应是表观遗传学中一个极为重要的过程，而寻找出能够抑制酶活性的分子就成为研究开发出新型药物的一个必不可少的过程。本项目旨在利用时间分辨免疫荧光分析手段建立高特异性，高灵敏度，高通量，简单易行的表观遗传学甲基化转移酶活性的分析检测方法。为此，本项目将设计和合成甲基酶催化反应产物S-腺苷-L-高半胱氨酸的完全免疫原。通过动物免疫制备能够高特异性识别S-腺苷-L-高半胱氨酸的多克隆和单克隆抗体。在此抗体基础之上，建立能够快速检测S-腺苷-L-高半胱氨酸浓度的分析方法，并据此计算出参与反应的甲基化转移酶的活性。通过改变免疫分析方法的各种条件来优化所建立方法的分析参数，并将优化后的分析检测方法应用到由甲基化供体，药物前体和酶组成的实际体系。本项目的成功研发，将可以用来高通量筛选小分子和大分子库，从而可以在短时间内筛选出对甲基转移酶活性有抑制的新药前体。

甲基转移酶催化的S-腺苷甲硫氨酸（SAM）甲基化反应是表观遗传学中一个极为重要的过程，而寻找出能够抑制酶活性的分子就成为研究开发出新型药物的一个必不可少的过程。本项目拟建立高特异性，高灵敏度，高通量，简单易行的表观遗传学甲基化转移酶活性（DNMT）的分析检测方法。为此，本项目设计和合成了一系列甲基酶催化反应产物S-腺苷-L-高半胱氨酸（SAH）的完全免疫原。通过动物免疫制备能够高特异性识别S-腺苷-L-高半胱氨酸的抗体，该抗体对SAH的结合力强，在此抗体基础之上建立了快速检测SAH分析方法，对SAH检测灵敏度为10 ng/mL，并能有效区分SAH和SAM，该体系能准确检测0.05-4 U/mL范围的甲基转移酶活性。通过改变免疫分析方法的各种条件来优化所建立方法的分析参数，并将优化后的分析检测方法应用到由甲基化供体，前体和酶组成的实际体系。本项目的成功研发，将可以用来高通量筛选小分子和大分子库，从而可以在短时间内筛选出对甲基转移酶活性有抑制的物质。