血人参保肝作用活性成分及其作用机制研究

With widely drug overuse and combination of drugs used in clinic, the caused liver damage & liver failure cases are very common, so it is particularly necessary to carry out the work of anti-liver injury drug development. Indigofera stachyoides Lindl. is the root of Indigofera stachyoides Lindl., a herbal medicine. This natural medicine is warm, slightly bitter taste, with invigorating vital energy and blood, increasing Yin and kidney. It is used in uterine bleeding, bruises, rheumatism, liver cirrhosis, dysentery and malnutritional stagnation etc. In our previous study, our group has gained two new compounds from Indigofera stachyoides Lindl. which showed strong protective effect to human liver cells, and these two were both shown harmfulless, non-cytotoxic, hepatoprotective characteristics etc. Their hepatoprotective effect and mechanism need to conduct a systemic study. Based on existing research results, we plan to carry out comprehensive substance studies, structure determination, hepatoprotective bioactivity and the mechanisms of Indigofera stachyoides Lindl. in hepatoprotective effect, discover new candidate compounds from the herb, expect to provide experimental basis for Indigofera stachyoides Lindl. drug development in hepatoprotective effect. This research will also show important references in clinical application and values of Indigofera stachyoides Lindl. crude drug and its drug products.

药物过度使用与联合用药引起临床上肝损害、肝衰竭病例十分常见，开展抗肝损伤药物开发工作显得尤为必要。血人参是豆科木蓝属植物茸毛木蓝(Indigofera stachyoides Lindl.)的根，血人参性温，味微苦涩，有补气摄血，滋阴补肾之功效，用于崩漏、跌打、风湿、肝硬化、痢疾及疳积等，广泛应用于民间。在我们前期研究中，从中药血人参药材中获得了两种对人肝细胞均有很强保护作用的新化合物，具有低毒、无细胞毒性保肝效果显著等特点，其保肝作用及其机制尚需进行系统的研究评价。本项研究拟在已有的研究基础上，对血人参药材中保肝活性成分进行系统分离、结构测定、保肝活性及其作用机制研究，以期发现新的具有保肝活性化合物，为血人参保肝药物的研究提供基础实验依据，并对血人参药材及制剂药品的临床应用范围与价值提供重要的参考。

本次课题优化了苗药血人参总黄酮提取工艺, 确定最佳工艺条件; 建立了血人参药材薄层色谱鉴别和含量测定方法, 完善血人参药材的质量标准, 我们研究发现种植血人参药材的品质优于野生血人参药材，种植品种与野生品种指纹图谱相似度不小于0.972。.对血人参不同极性部位进行小鼠体内保肝活性筛选，测定小鼠血清中ALT活性, 确定血人参乙酸乙酯部位是血人参药材的保肝活性部位。从血人参乙酸乙酯保肝活性部位分离鉴定了22个化合物, 其中有5个化合物首次从豆科植物中分离得到；化合物kaempferol-7-glucoside、medicarpi、3-hydroxy-8,9-dimethoxypterocarpan、calycosin首次从木蓝属植物中分离得到；化合物β-sitosterol-D-glucoside、maackiain首次从血人参药材中分离得到, 丰富了血人参药材的化学成分研究。.建立了四氯化碳诱导体外人HL-7702肝细胞损伤模型，采用MTT法研究被筛单体化合物在四氯化碳诱导HL-7702细胞肝损伤模型下的肝保护作用, 结果显示化合物maackiain、7-hydroxyl-4'-methoxyflavanone、6, 3'-dihydroxyl-4' -methoxyisoflavone对CCl4诱导的肝损伤细胞具有明显的肝保护作用 (p < 0.05)。通过三种经典小鼠急性肝损伤体内动物模型, 测定给予药物治疗小鼠的血清中ALT和AST活性, 肝组织GSH和MDA含量; 观察小鼠死亡情况以及小鼠肝脏病理学的变化情况; Realtime-PCR检测肝组织CYP1A2、CYP2E1、CYP3A11、MT-1、Nrf-2、Mip2、IL-1β等基因。研究发现血人参对CCl4、APAP或D-Gal诱导小鼠急性肝损伤模型具有保护作用，血人参通过 1) 抑制P450酶CYP1A2、CYP2E1、CYP3A11基因表达; 2) 升高MT-1表达、GSH含量与降低MDA含量，直接清除自由基、提高抗氧化物酶的活性和降低脂质过氧化物水平; 3) 抑制Egr-1和TNF-α基因表达; 激活Nrf2信号通路, 下调炎症反应因子Mip2和IL-1β表达的药理作用机制, 最终发挥血人参药材的保肝、治疗肝损伤的药理作用。上述系列研究工作为血人参保肝药物开发奠定了坚实的药学基础。