TL1A-死亡受体系统在血管内皮细胞中的功能

我们在前期实验研究中发现发生急性排异反应的肾组织中血管内皮细胞表达死亡受体3（DR3）明显增加。而到目前为止尚无DR3在内皮细胞内功能的报道。本课题拟研究DR3在内皮细胞中是否有功能及有何种功能。通过探索各种调节DR3表达的因子，找到引起内皮细胞表达DR3增加的因素。阐明内皮细胞表达DR3上调后，对其配体TL1A的反应有何改变。包括细胞内信号转导的变化，细胞表达或分泌炎症因子的变化，细胞活化和增殖的变化。另外，我们最近报道了TL1A通过DR3以外未知的受体介导的一种细胞反应，这种反应在内皮细胞内是否存在及怎样发生都尚待探索。本课题主要对体外培养的内皮细胞进行相关研究，希望体外细胞功能性研究与我们在体内组织中的发现互补一致，找到肾脏血管内皮细胞损伤的新机制，对肾小球肾炎、自身免疫性血管炎等血管损伤相关疾病的预防和治疗有重要意义。

TL1A-死亡受体3系统在内皮细胞中的功能.死亡受体是TNF受体超家族中的一个亚类，在肾脏病理损伤中起重要作用。我们以往的研究表明，在肾脏炎症反应时死亡受体3（DR3）在人和鼠肾组织的小管上皮细胞中的表达上调。本项研究表明肾脏间质内皮细胞也表达DR3，这些内皮细胞在外源性DR3配体的作用下可转导细胞内NF-κB的经典活化途径。体外培养的人脐静脉内皮细胞表达全长的DR3, 与阳性对照血液细胞系TF-1基因序列和蛋白分子量相同。但表达水平极低。外源性TL1A刺激细胞后无NF-κB活化。我们在实验中试用了几种细胞因子以及细胞因子组合，未能增加内皮细胞表达DR3。为此我们构建了真核细胞表达的DR3质粒。通过转染内皮细胞增加DR3表达。TL1A刺激表达较高水平DR3的内皮细胞引起NF-κB的活化，和细胞粘附因子E-selectin的增加。说明内皮细胞内部具备DR3信号转导的结构成份，只是DR3在细胞表面的水平不足。通过转染我们还发现了内皮细胞内表达DR3的另一种异构体，但时间限制未能对这个新型DR3进行下一步功能性研究。为了确证上述TL1A-DR3系统的特异性，我们检测DR3基因敲除鼠的内皮细胞对TL1A的反应。TL1A只引起野生鼠内皮细胞NF-κB活化，而DR3基因敲除鼠的内皮细胞无反应。同时我们应用TNF做阳性对照，两种鼠的内皮细胞对TNF的反应无明显不同。这部分结果正在投稿中。.我们的结果表明在肾脏炎症反应中，DR3与配体TL1A 可以进一步扩大炎症效应。这与肿瘤方面的研究结果不同，肿瘤组织内增生期血管内皮细胞TL1A-DR3系统主要引起细胞凋亡。我们的研究结果支持TL1A及DR3抑制剂应用于炎性如自身免疫性肠病或移植排斥反应疾病，但对肿瘤患者却应慎重权衡。.另外我们在研究计划中提出了TL1A在内皮细胞中是否调节TNF受体(TNFR2)的表达，结果是否定的。但我们发现TNFR2表达是受TNF转化酶活化调节的，这部分结果已发表在American Journal of Nephrology, 并注明了本项基金资助。