高迁移率族蛋白B1在J亚群禽白血病病毒致病中的作用

高迁移率族蛋白B1（high mobility group protein B 1, HMGB1）是高迁移率族蛋白家族成员之一，与人类多种肿瘤疾病的发生、发展相关。本课题组在蛋白质组学研究中发现感染J亚型禽白血病病毒（ALV-J）细胞中的HMGB1显著升高。为深入了解HMGB1 在ALV-J致病过程中可能的生物学功能，本项目拟通过观察ALV-J感染后chHMGB1的动态变化，明确chHMGB1与病毒复制的关系，测定病毒感染细胞中chHMGB1对细胞活力和生长的影响及可能的转化细胞能力，确定chHMGB1在病毒感染细胞内信号传导分子机制，从而为明确ALV-J的致病机制提供理论依据。

高迁移率族蛋白B1在多种动物肿瘤疾病发生发展过程中发挥作用，通过三年的研究，本课题取得了预期的研究结果，揭示了chHMGB1在J亚群禽白血病病毒感染过程中的作用。主要研究结果如下：1. chHMGB1基因的克隆，表达载体的构建及蛋白纯化鉴定。扩增chHMGB1基因，并成功克隆到原核及真核达载体中。国内外首次在体外表达了chHMGB1重组蛋白，并进行了纯化鉴定。2. chHMGB1特异性抗体的制备。课题组制备得到亲和层析纯化的多克隆抗体和特异性的单克隆抗体。制备的抗体能特异性识别天然的chHMGB1，为chHMGB1的研究提供了重要的生物试剂。3. chHMGB1检测方法的建立及应用。首次建立了家禽chHMGB1的双夹心ELISA方法和荧光定量PCR方法。检测正常鸡组织和细胞中chHMGB1基因的表达水平，从而为进一步研究chHMGB1在家禽疾病免疫调节和炎症过程中的生物学作用提供了一种快速、可靠的检测方法。4. 病毒感染状态下，chHMGB1在体内外细胞和组织中的动态变化。课题对J亚群禽白血病毒感染的细胞和动物组织中的chHMGB1进行了动态的观察和记录。体外细胞实验总体而言没有非常明显的规律可循；体内试验发现肾脏中chHMGB1与病毒基因的变化趋势基本一致，而在肝组织中chHMGB1基因与病毒基因的表达一直处于一个波动的状态。 病毒感染和脂多糖刺激细胞中chHMGB1蛋白定位结果提示不同物种的高迁移率族蛋白B1可能具有不同的生物学功能或不同的作用途径和方式。5. J亚群病毒感染HD11细胞诱导功能性chHMGB1释放。首次发现ALV-J能够诱导病毒感染的HD11细胞发生凋亡。在细胞发生凋亡的同时将细胞内的chHMGB1释放，有效的刺激外周血单核细胞合成TNFα，进一步引起病毒感染细胞的凋亡。6. chHMGB1对J亚群禽白血病病毒复制的影响。结果表明， pcDNA3.1-chHMGB1暂态表达抑制ALV-J在细胞中的复制；chHMGB1功能性抑制剂作用于细胞后，病毒复制能力增强；纯化chHMGB1添加到细胞培养中，病毒复制能力略有下降，但差异不显著。总体而言，chHMGB1增加会抑制ALV-J病毒的复制。以上主要研究成果为全面揭示J亚群禽白血病病毒的致病机制提供理论依据。