羊传染性脓疱病毒（ORFV）强、弱毒感染宿主细胞差异蛋白鉴定及功能分析

Orf is a kind of viral zoonotic infectious disease, it's a serious threat to the healthy development of sheep industry and people's health . Attenuated ORFV which was attenuated by passaged serially in heterologous cells plays a key role in prevention and control Orf. The differential proteins and their functions after virulent、attenuated ORFV infected ovine fibroblasts cells are obscure. After have been isolated several ORFV strains, replicated animal models, investigated molecular epidemiology, researched pathogenic molecular mechanism of other animal virus by proteomics methods, we will use ORFV virulent、attenuated strains as research objects. Differential proteins will be found and identified by two-way fluorescence difference gel electrophoresis（2D-DIGE） proteomics methods after ORFV virulent、attenuated strans infected host cells. The regulation network of differentially expressed proteins will be drawn and the proteins functions during ORFV infection host cells will be analysed and proofed.The results will lay fondations for revealing the attenuated molecular mechanisms of ORFV vaccine strain from proteomics levels.

羊传染性脓疱（俗称羊口疮，Orf）是一种人畜共患性病毒性传染病，严重威胁养羊业的健康发展和人民身体健康。经异源细胞连续传代致弱的弱毒株能有效预防和控制该病，弱毒株和强毒株感染宿主细胞差异表达蛋白及其功能尚不清楚。本研究小组在完成多株羊口疮病毒分离鉴定、病例复制，分子流行病学调查和利用蛋白质组学研究其他病毒致病分子机制的基础上，本课题拟以ORFV强、弱毒株为研究对象，通过双向荧光差异凝胶电泳（2D-DIGE）技术寻找并鉴定ORFV强、弱毒株感染羊成纤维细胞的差异表达蛋白，分析并验证差异表达蛋白功能，借助生物信息学方法绘制差异表达蛋白的调控网络，揭示差异表达蛋白在ORFV感染宿主细胞中的作用，为从蛋白质组学水平分析羊口疮病毒疫苗株致弱的分子机制奠定基础。

羊传染性脓疱（俗称羊口疮，Orf）是一种人畜共患性病毒性传染病，严重威胁养羊业的健康发展和人民身体健康。经异源细胞连续传代致弱的弱毒株能有效预防和控制该病，弱毒株和强毒株感染宿主细胞差异表达蛋白及其功能尚不清楚。本课题以ORFV 强、弱毒株为研究对象，通过双向荧光差异凝胶电泳（2D-DIGE）技术寻找并鉴定到ORFV 强、弱毒株感染羊成纤维细胞的差异表达蛋白20个其中上调表达16个，下调表达4个。生物信息学分析表明差异表达蛋白主要参与蛋白酶体，糖酵解， 磷酸戊糖途径，NF-kappa B 信号通路和抗原呈递途径等。通过qRT-PCR和Western-blot技术对其中部分差异表达蛋白进行了验证。选取3个基因RPS21，YBX1和IFIT5，融合GFP蛋白后转染GSF细胞发现RPS21和IFIT5主要分布于细胞核，YBX1主要分布于细胞质。构建IFIT5真核表达质粒转染GSF细胞后发现IFIT5能够显著抑制ORFV的复制。结果证实和强毒株相比，ORF弱毒疫苗株致IFIT5上调表达，而IFIT5的上调表达抑制了orfv的复制，抑制的分子机制将是下一步研究方向。本研究从蛋白质组学水平初步分析了羊口疮病毒疫苗株致弱的分子机制。