将我国鸡新城疫强毒株F48E9在SPF鸡增殖,提取RNA,用合成的一对寡聚核苷酸引物(上游引物5'羰加HindⅢ酶切位点,下游引物5'端加SalI酶切位点)进行RT-PCR,合成大小约2Kb的F基因片段。将F基因片段用hindⅢ和SalⅠ消化后,与同时用上述二酶消化的pUC18质粒用T4连接酶连接,转化大肠杆菌JM109。将转化菌涂于含Amp、IPTG、X-gal的LB平板上培养,从出现的和白色菌落中用源位杂交法筛选出7个阳性克隆株。用阳性克隆株裂解物做SDS-PAGE,有拳的融合蛋白质谱带出现。进一步用抗体探针做惠斯顿免疫吸附,都显示出表达的融合蛋白质反应带,各该反应应带位置与SDS-PAGE图型中各融合蛋白质的位置相对应,证明能特异性地与抗体相结合,因而具有良好的免疫原性。
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数据更新时间:2023-05-31
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