肝病实脾法对免疫性肝损伤小鼠ERS介导肝细胞凋亡影响的研究

Nourishing the spleen is an important treatment to cure to liver disease cure which has been mentioned in 'Synopsis of Prescriptions of the Golden Chamber'.The treatment can reduce the liver cell apoptosis and improve the clinical effect. Recent studies showed that：the prescription of Sinisan soothing Liver to regulate Qi added the prescription of Si Junzi Tang nourishing the spleen and benefiting qi can reduce the liver cell apoptosis and improve the clinical effect.Liver cell apoptosis leading to liver damage is a kind of pathological changes in liver disease. Hepatocyte apoptosis by ERS were found to be important liver cell apoptosis way in recent years. Methods of this study: Using BCG plus LPS to induce immune hepatic injury in mice; Si Junzi Tang and Sinisan, Si Junzi Tang, Sinisan be used as therapeutic medicines; Observing Liver tissue pathomorphologic changes and testing Liver cell DNA fragments content,genes and the protein expression of CHOP,GRP78,caspase-12. Objective: To investigate the influence of nourishing the spleen on the hepatocyte apoptosis by ERS of immunized mouse liver damage,and explore the righting method of TCM treatment applied in liver disease.

《金匮要略》中提到"见肝之病，知肝传脾，当先实脾"的肝病实脾法是中医治疗肝病的重要扶正之法，能提高肝脏疾病的治疗效果。近年来的研究表明在四逆散等疏肝理气方药中加入四君汤等相关健脾方药能有效减少肝脏疾病中肝细胞凋亡减轻肝损伤。肝细胞凋亡导致肝损伤是多种肝脏疾病共有的一种病理变化。细胞内质网应激反应（ERS）介导的肝细胞凋亡是近年发现的重要的肝细胞凋亡途径。本课题建立卡介苗加脂多糖(BCG+LPS)所致小鼠免疫性肝损伤模型，以健脾益气方四君子汤与疏肝理气方四逆散合方，及以四君子汤，四逆散分别做为治疗药，通过对肝功能、肝细胞DNA片段含量检测、肝脏组织病理形态学观察，及ERS介导的细胞凋亡途径相关的CHOP、GRP78、caspase-12的基因和蛋白表达的测定，探讨肝病实脾法对ERS介导肝细胞凋亡的影响机制，对中医治疗肝病之法提高抗肝损伤的疗效机制进行有益的探索。

肝病实脾法是中医治疗肝病的重要扶正之法。研究表明应用肝病实脾法即在肝病治疗中使用健脾扶正药能减少肝细胞凋亡提高肝抗损伤能力，但其作用机制尚待探讨。肝细胞凋亡导致肝损伤是多种肝脏疾病共有的一种病理变化。细胞内质网应激反应（ERS）介导的肝细胞凋亡是近年来发现的重要的肝细胞凋亡途径。本研究建立刀豆蛋白（conA）进行尾静脉注射所致小鼠免疫性肝损伤模型，以健脾益气方四君子汤与治疗病毒性肝炎常用经方四逆散合方，及四君子汤、四逆散分别做为治疗药，对肝功能、肝细胞DNA片段含量检测、肝脏组织病理形态学观察，证明肝病实脾法能更好降低AST、ALT、MDA、NO水平，有效提高肝抗过氧化能力，提高肝抗损伤能力；对ERS介导的细胞凋亡途径相关的CHOP、GRP78、caspase-12的基因和CHOP、GRP78、caspase-12、JNK、Bcl-2、Bax蛋白表达检测，提示肝病实脾法主要通过影响肝细胞中的CHOP、caspase-12、JNK、Bcl-2、Bax等相关蛋白和酶，从而减少ERS介导的肝细胞凋亡，减轻肝损伤；但对GRP78诱发的肝细胞凋亡影响不大。通过本研究，对中医治疗肝病之法提高肝损伤的疗效机制进行有益的探索，为肝病实脾法的临床运用提供实验依据。