HMGB1介导的自吞噬对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞凋亡、增殖、迁移及侵袭的影响及作用机制研究

Rheumatoid arthritis synovial fibroblasts (RASFs) play an important role in synovitis invitation and join destruction. RASFs display the behavior of apoptosis resistant, proliferation, migration and invasion like tumor cells. In our preliminary study, we found that autophagy induction contributes to the resistance to methotrexate treatment in rheumatoid arthritis fibroblast-like synovial cells through HMGB1. But the mechanism is remains unclear. Therefore, we intend to detect the lever of HMGB1 in the extracellular medium, cytoplasm and nuclear. In the meantime, the way that HMGB1 up-regulate autophagy will be valued. Hereby, we can illuminate the mechanism of HMGB1 up-regulation autophagy in RASFs. We further observe the change and mechanism of apoptosis, proliferation, migration and invasion of RASFs in vitro and vivo by up or down regulating the HMGB1-mediated autophagy. Ultimately, effect and mechanism of HMGB1-mediated autophagy on apoptosis, proliferation, migration and invasion in RASFs will be clarified to provide new idea for therapy of RA.

类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞（Rheumatoid Arthritis Synovial Fibroblasts, RASFs）在滑膜炎形成和关节破坏中起重要作用。因其具有肿瘤细胞的特点，常表现出凋亡抵抗，增殖、迁移及侵袭性增加。我们前期在甲氨喋呤刺激RASFs的研究中发现抑制HMGB1介导的自吞噬可改善RASFs的药物抵抗，促进其凋亡。但其具体作用机制尚不清楚。因此，本课题拟首先在细胞水平检测RASFs胞外、胞质和胞核的HMGB1的表达量及其上调的具体机制，同时检测HMGB1介导自吞噬具体方式，阐明RASFs中HMGB1介导的自吞噬的反应机制；进一步在细胞水平和动物模型上通过下调及上调HMGB1介导的自吞噬，观察RASFs凋亡、增殖、迁移及侵袭的变化及具体作用机制。最终阐明HMGB1介导的自吞噬对RASFs凋亡、增殖、迁移及侵袭的影响及机制。为类风湿性关节炎的治疗提供新思路。

1、背景. 类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞（Rheumatoid Arthritis Synovial Fibroblasts, RASFs）在滑膜炎形成和关节破坏中起重要作用。因其具有肿瘤细胞的特点，常表现出凋亡抵抗，增殖、迁移及侵袭性增加。我们前期在甲氨喋呤刺激RASFs的研究中发现抑制高迁移率族蛋白B1（High Mobility Group B1, HMGB1）介导的自吞噬可改善RASFs的药物抵抗，促进其凋亡。但HMGB1及其介导的自吞噬在类风湿性关节炎中异常的原因，HMGB1增高如何诱导自吞噬及影响滑膜成纤维细胞增值、迁移及侵袭的机制不明。.2、主要研究内容.1）HMGB1基因多态性与RA易感性及抗药性；.2）HMGB1介导RASFs线粒体自噬的方式及机制；.3）HMGB1介导的自吞噬对 RASFs 凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响，并在动物模型上验证 HMGB1 介导的自吞噬的作用；.4）HMGB1在RA患者的滑膜组织中异常表达及异常表达的机制；.5）miR-449a对RASFs增殖、侵袭及迁移的影响及关于miR-449a异常表达的进一步探索研究。.3、重要结果及关键数据.1）HMGB1基因rs4145277、rs2249825、rs1412125、rs1045411位点SNPs与中国汉族RA患者易感性相关，而rs4145277、rs2249825多态性与MTX耐药有关。.2）HMGB1通过HIF-1a介导RASFs线粒体自噬；抑制HIF-1a后，HMGB1介导的RASFs线粒体自噬减弱。.3）甲氨蝶呤影响类风湿性关节炎中HMGB1的表达，RASFs通过HMGB1诱导的自吞噬抵抗甲氨蝶呤诱导的凋亡；抑制HMGB1，甲氨蝶呤诱导的RASFs凋亡率增加，而增殖、侵袭及迁移减低；.4）MiR-449a在RA滑膜组织中下调，抑制了RA- fls的增殖和迁移。MiR-449a直接靶向HMGB1并抑制其表达。Yin Yang 1(YY1)负调控miR-449a表达，在RA-FLS中形成相互抑制循环。.4、科学意义.根据这些成果，我们寻找到4个影响RASFs凋亡、增值、迁移及侵袭的关键靶点（HMGB1、miRNA-449a、YY1、HIF-1a）。后续可以设计针对这些关键靶点设计药物，为新药的研发及现有药物的改良提供理论依据，为类风湿性关节炎的治疗提供帮助。