青海高原农牧区结核病分子流行病学特征与传播模式研究

在长期的进化过程中结核杆菌和某一地域宿主之间可以形成较为稳定的适应关系，使不同地区流行的结核菌很可能存在分子水平上的差异。青海高原自然环境恶劣，结核流行严重，尤以农牧区为甚。人、牛均可感染结核，农牧区可能有不明数量的人感染了牛型结核。本课题采用间隔区寡核苷酸分型、MIRU-VNTR分型技术及LSP大序列片段缺失分析，立足青海高原，对青海高原流行的结核杆菌进行基因指纹图谱和主要的LSPs多态性的研究及与耐药性的关系，揭示青海高原地区流行的结核菌的基因类型、分子特征，探讨高原低氧低压环境对结核杆菌的影响。对农牧区人群和畜群结核病进行流行病学调查，对人源和牛源的结核病原体进行MIRU-VNTR和Spoligotyping分型，通过比较其基因图谱，并结合流行病学资料，研究高原农牧区结核的传播模式。本研究结合青海地域对结核开展跨学科研究，对人间及畜群结核病的防制具有重要意义。

青海省地处青藏高原，高寒缺氧，自然条件恶劣。全省580多万人口中，结核菌感染者约占三分之一。在长期的进化过程中结核杆菌和某一地域宿主之间可以形成较为稳定的适应关系，使不同地区流行的结核菌很可能存在分子水平上的差异。青海特殊的地理环境及人群特点，很可能使本地区的结核分枝杆菌的分子特点与其它地区不同。为了了解青海高原结核分枝杆菌的分子流行病学特征，本课题采用间隔区寡核苷酸分型（spoligotyping）、可变数量串联重复序列(variable numberof tandem repeats,VNTR)分型技术及大序列片段多态性（large sequence polymorphisms，LSPs）缺失分析方法，对青海高原流行的约250株结核分枝杆菌进行了分型研究。 结果显示，应用Spoligotyping方法对251株结核分枝杆菌临床分离株进行了分型，可分为北京家族基因型群和非北京家族基因群2大群，分别占73.71%(185/251)及26.29%(66/251)；经聚类分析，251株菌共分为47种基因型，其中45株为独特类型, 其余206株分为6个基因簇。典型北京家族基因占北京家族菌株的85.41%(158/185); 非北京家族菌株表现为高度的基因多态性，可分为37个基因型，其中31株为位独立基因型。采用15个位点的数目可变串联重复序列（VNTR）分型，251株结核分枝杆菌临床分离株可分为4个基因群，238个基因型,其中以第Ⅱ群为优势群。对本地区分离的237株结核分枝杆菌，研究了RD105、RD142、RD150、RD181、RD239等大片段基因缺失情况，发现至少存在6种RD基因型，220株为以缺失RD105的“北京家族”菌株，非“北京家族”菌株为17株，分别占92.83%与7.17%。另外首次发现6株菌缺失RD239基因，为印度-大洋洲系菌株。人群流行病学调查发现，青海结核患者主要发生在农牧区，以农牧民及藏族患者最多；青海农牧区学校多为寄宿制，学生结核病相关知识缺乏，存在结核病暴发的隐患。动物结核流行病学调查显示，采用PPD皮内变态反应方法监测牛17万头余，检出阳性牛106头，平均阳性率为0.06%。本项目首次开展了青海高原结核病分子流行病学研究，揭示了青海高原流行的结核分枝杆菌的分子特征，对本地区结核病的治疗、预防与控制具有重要价值。已发表论文6篇。