基于麸煨肉豆蔻“减毒增效”的物质基础及炮制机理研究

The processing method of Nutmeg was roasted with wheat flour from the Pharmacopeia of 1985 edition to 2005 edition, but it was changed to be roasted with wheat bran in the Pharmacopeia of 2010 edition. At present much researchment of Nutmeg was about volatile ingredient, much studies on the processing mechanism was about the contents of volatile ingredient and their pharmacological function, however, it was not clear to study on non-volatile ingredient and chemical constituents having functions on reducing toxicity and enhancing efficiency.Based on the earlier experiment, the techniques and methods were adopted to seperate effective components and cytotoxic components.Through pharmacological and toxicological experiment,chemical components with pharmacological function were found by analysing the relation of fingerprint with pharmacodynamics.Combined with pharmacokinetics and metabolomics to compare the variety character of content of effective component and toxical component, the difference of pharmacological and toxicological function, the absorbment difference of effective component in the enbody and the influence on the potential metabolites before and after the processing, taking Nutmeg roasted with wheat bran and wheat flour. The study would be futher elucidate the mechanism of the processing method. The study can be helpful to popularize the processing method and standardize the quality control of Nutmeg roasted with wheat bran, guide us in rationality of herb use in clinical therapy.

肉豆蔻炮制方法从1985年到2005年的历版药典均为面煨法，2010版药典改为麸煨法。目前对麸煨肉豆蔻的研究主要以挥发油报道较多，且炮制机理的阐述主要侧重于挥发油类成分变化和药理药效方面，而在阐明炮制机理重要环节的非挥发性成分（木脂素类、总木脂素等）的研究、"减毒增效"的物质基础研究等方面还不够深入，因此本课题在前期研究工作的基础上，对麸煨肉豆蔻的有效部位、毒性部位进行化学成分分离，通过药效、毒理、谱效关系等方法确定"减毒增效"的物质基础，并结合药代动力学、代谢组学等分析技术，对炮制前后毒、效成分含量变化特征、体内吸收差异性及对体内内源性成分的影响等方面进行深入系统的研究，拟从更深层次上阐明麸煨肉豆蔻"减毒增效"的物质基础及炮制机理，为麸煨肉豆蔻炮制工艺的推广、质量的标准化及临床用药提供科学依据。

本课题为1年期小额资助项目，围绕研究目标，对麸煨肉豆蔻的药效物质基础及“减毒增效”的炮制原理进行相关的系列研究，主要通过离体肠实验、急性毒性试验、长期毒性试验、化学成分分离、炮制前后毒效成分的变化及止泻、抗炎、抗氧化作用研究，确定了肉豆蔻及麸煨肉豆蔻的止泻成分主要为挥发油及非挥发性、非水溶性的木脂素类成分，其中首次发现提油后药渣醇提物及其石油醚提取物、乙酸乙酯提取物具有止泻作用。从确定的麸煨肉豆蔻的有效部位及毒性部位中分离并鉴定了8个化合物，分别为利卡啉-B、去氢二异丁香酚、β-谷甾醇、胡罗卜苷、黄樟醚、肉豆蔻醚、甲基丁香酚、甲基异丁香酚。谱效分析研究结果表明，肉豆蔻中与止泻相关的峰有7个，与毒性（LD50）相关的峰有13个。并在此基础上首次采用紫外分光度法建立总木脂素的含量测定方法，采用正交试验确定了总木脂素的提取工艺及麸煨肉豆蔻的炮制工艺。急性毒性试验研究表明肉豆蔻及麸煨肉豆蔻毒性成分主要为挥发油，水煎液无毒性；并首次发现提油后药渣醇提的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物也存在毒性，但明显低于挥发油。采用HPLC法对肉豆蔻炮制前后相关的化学成分进行了测定，麸煨后化学成分中挥发油、肉豆蔻醚、黄樟醚、总木脂素、去氢二异丁香酚、肉豆蔻木脂素含量均降低，止泻成分甲基丁香酚、甲基异丁香酚增加；长期毒性试验研究结果表明肉豆蔻生品及炮制品（麸煨、面煨）均表现出一定毒性，给药组均体重增长缓慢，对血常规、血液生化指标、脏器指数有一定影响；特别是生品高剂量组影响较大，其他各组影响较小，但各组主要脏器的病理切片检查均无明显病变。表明生品与炮制品均具有一定毒性，炮制后具有减毒作用。另外，并首次采用麸煨、面煨后的乙醇提取液进行了止泻、抗氧化、抗炎作用研究，这与以往只采用挥发油研究不同，结果止泻、抗炎作用增强，抗氧化作用减弱，麸煨、面煨二者比较无显著性差异。综上研究，本研究进一步证明肉豆蔻炮制后，具有“减毒增效”的作用，除挥发油毒效成分外，其提油后的醇提物所含的木脂素类等成分也具有药效作用，其止泻、抗炎、抗氧化作用主要为二者协同作用的结果，且麸煨法可以取代面煨法，为相关肉豆蔻新药开发的工艺设计、麸煨肉豆蔻炮制工艺及机理的研究、质量的标准化及临床用药提供科学依据。