乳腺癌细胞分泌的外体（Exosome）miR-105 通过c-myc驯化肿瘤基质细胞促乳腺癌发展的机制研究

Tumor progress results from the synergy between tumor cells and tumor microenvironment. It has been reported that tumor cells-secreted exosomes regulate tumor microenvironment and promote tumor pregression. Recently we have found that exosomal miR-105 secreted by breast cancer cells plays an important role in regulating tumor microenvironment. Based on our preliminary data that MXI1(Mad), a gene inhibiting c-Myc function is a miR-105 target, and the previous report that enhancing c-Myc signaling remodels stromal cells favoring tumor development, we will explore the role of exosomal miR-105 secrected by breast cancer cells in promoting the development of breast cancer through educating stroma cells and its underlysing mechanisms. An in vivo study will also be carried out to test whether targeting miR-105/c-Myc signaling antagonizes the tumor growth of triple negative breast cancer. This study is aimed to provide new strategies and theoretical basis for the prevention and treatment of triple-negative breast cancer.

肿瘤的发展依赖于肿瘤细胞与肿瘤微环境协同作用，肿瘤细胞可通过分泌外体(Exosome) 调节微环境细胞，促进肿瘤的发展。我们发现乳腺肿瘤细胞分泌的外体miR-105 具有调节肿瘤微环境的作用，基于miR-105 通过下调靶基因MXI1从而增强c-Myc信号通路的工作基础，以及c-Myc具有活化基质细胞促进肿瘤发展的作用，为明确乳腺肿瘤细胞分泌的miR-105 通过c-Myc 驯化微环境细胞促进乳腺癌发展的作用和机制，本课题将通过建立可诱导敲除miR-105 的乳腺癌细胞系以及稳定过表达miR-105、c-Myc的基质细胞系，结合RNA 干扰技术，研究外体miR-105通过增强c-Myc信号驯化基质细胞，从而促进乳腺癌发展的机制，并通过体内试验和临床标本加以验证，最后体内实验探讨靶向拮抗miR-105/c-Myc 信号通路抑制三阴乳腺癌细胞生长的效应。

肿瘤的发展依赖于肿瘤细胞与肿瘤微环境协同作用，肿瘤细胞可通过分泌外体(Exosome)驯化微环境细胞，促进自身生长和转移。本项目主要研究三阴性乳腺癌细胞通过分泌外泌体miRNA-105与肿瘤细胞微环境中肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts ，CAFs)）和乳腺上皮细胞（mammary epithelial cell，HMEC）相互作用，从而促进自身发展的作用和机制。.① 课题首先通过过表达miR-105和MYC 以及同时过表达miR-105 和MYC 的细胞系，研究乳腺癌细胞产生的miR-105与MYC 具有正反馈相互调节作用，肿瘤细胞能够通过分泌外体将这种正反馈相互调节的作用模式传递给肿瘤微环境中的肿瘤相关成纤维细胞（CAF），重新编程肿瘤微环境CAF细胞代谢，增强CAF 糖酵解能力，从而促进肿瘤生长。接下来通过构建MYC荧光素酶报告质粒，建立过表达MXI1 的细胞系，证明miR-105通过靶向下调MXI1上调MYC水平及转录活性，同时在含有hsa-miR-105-1/2的宿主基因GABRA3的启动子中检索发现了MYC的反应元件，因此提出MYC-miR-105-MXI1-MYC调节环，阐明了miR-105与c-Myc具有正反馈相互调节促进肿瘤生长和糖酵解的作用机制。最后利用患者来源的移植物（PDX）中分泌高水平miR-105的乳腺癌细胞，与来源于同一患者肿瘤块的CAFs 共同接种建立小鼠原位移植留模型，体内证实CAFs 能够促进肿瘤细胞生长，拮抗CAFs 中miR-105则抑制肿瘤的生长，体内证实了体内靶向拮抗miR-105/c-Myc 信号通路能够抑制乳腺癌的发展。② 三阴性乳腺癌细胞分泌外体miR-105， 通过外体（exosome）运送到乳腺上皮HMEC，靶向降低紧密连接蛋白ZO-1 的水平，破坏上皮屏障，从而促进TNBC 的转移。.上述研究结果揭示了三阴性乳腺癌细胞通过分泌外泌体（exosomes）来传递复杂的生物信息，介导细胞间通讯，从而促进自身转移以及转移后如何征服、定值在微环境并发展成大的转移灶的新机制，拓展了肿瘤微环境研究领域，提出了靶向肿瘤微环境的治疗新策略，此研究为早期预测和控制TNBC的侵袭转移提供了新的思路，对TNBC病人治疗方案的制定及预后具有重要指导意义，也为其它易侵袭转移的恶性肿瘤的转移预测和